hplc测定止嗽丸中甘草苷的含量

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1、HPLC测定止嗽丸中甘草苷的含量作者：吴义忠，朱焕容，许丽芬【摘要】　　目的建立止嗽丸中甘草苷的含量测定方法。方法采用HPLC法，色谱柱：HypersilC18柱(5μm;4.0mm×250mm):流动相:乙腈0.5％冰醋酸（体积比20∶80）；流速:1.1mL/min；检测波长:276nm；柱温:30℃；进样量:10μL。结果甘草苷在0.020～2.001μg范围内与峰面积呈良好的线形关系：r=1.000，平均回收率98.7%，RSD为0.38%。结论所建立的方法简便可行、重现性好、可作为止嗽丸质量控制的方法。【关键词】止嗽丸HPLC甘

2、草苷质量标准　　止嗽丸收载于卫生部药品标准中药成方制剂第一册(1989)，由紫菀（制）、白前、甘草等七味中药组成，具有止咳去痰、疏风理肺之功效，用于风邪犯肺、咳嗽咽痒、痰不易咯出者。原质量标准中，只有性状和检查项，无其他检验项目。本文采用HPLC法对处方中甘草所含甘草苷进行含量测定，以便对该制剂进行质量控制。　　1仪器与试药　　LC20A高效液相色谱仪，可变紫外检测器(日本岛津)。　　甘草苷对照品（由中国药品生物制品检定所提供，批号：111610200503）；止嗽丸为实验室样品；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。　　2方法

3、与结果　　2.1色谱条件　　色谱柱:HypersilC18柱(5μm;4.0mm×250mm):流动相:乙腈0.5％冰醋酸（体积比20∶80）；流速1.1mL/min；检测波长276nm；柱温30℃；进样量:10μL。　　2.2对照品溶液的制备　　取甘草苷对照品适量，加体积分数70％乙醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。　　2.3供试品溶液的制备　　取本品粉末约1g，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数70％乙醇100mL，称定重量，超声处理30min，取出，再称定重量，用体积分数70％乙醇补足减失的重量，滤过，即得。　　2.4方法的专属性

4、考察　　在上述的色谱条件下，将甘草苷对照品溶液、供试品溶液、甘草阴性对照溶液注入液相色谱仪中，得HPLC图（见图1），结果显示阴性对照无干扰。　　A.甘草苷对照品;B.止嗽丸样品;C.甘草阴性对照　　图1HPLC图谱（略）　　Figure1HPLCchromatograms　　2.5线性关系的考察　　精密称取甘草苷对照品适量，加流动相制成每1mL分别含甘草苷2.001、4.002、10.00、20.01、40.02、200.1μg的溶液，分别吸取10μL进样测定峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品的质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程

5、:y=29543x+144.52，r=1.000。表明甘草苷进样量在0.020～2.001μg范围内与峰面积呈良好的线形关系。　　2.6精密度试验　　分别取对照品溶液10μL，连续进样5次，测定峰面积，计算得甘草苷的峰面积RSD分别为0.4%。　　2.7重复性试验　　　　精密称取同一批号样品，按供试品溶液制备方法平行制备5份，依法测定，计算甘草苷含量RSD值为0.6%。　　2.8稳定性试验　　取同一供试品溶液，于0、2、3、4、6、8、11、24h进样测定，计算得甘草苷的峰面积的RSD为1.0%,表明样品溶液在24h内稳定。　　2.9加样回

6、收率试验　　分别精密称取已知含量（含量为1.312mg/g）的本品适量6份，分别精密加入甘草苷对照品溶液（0.2001mg/mL）各3mL，按”2.3”项下方法制得供试品溶液。分别吸取上述供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定其中甘草苷的总量，与止嗽丸中应含有的甘草苷总量进行比较，计算回收率，结果见表1。　　表1甘草苷回收率试验测定结果（略）　　Table1Resultsofrecoverytest　　2.10样品测定　　分别精密称取不同批号的止嗽丸适量，按“2.3”项下方法制备溶液，按“2.1”项下色谱条件进行HPLC分析，结果3个批

7、号的样品所测得的平均含量为1.312、1.323、1.298mg/g。　　3讨论　　甘草中的黄酮类成分具有抗氧化、抗病毒、抗炎、抗溃疡作用［１］。甘草苷是甘草的黄酮类成分之一，也是止嗽丸治疗疾病的活性成分，故选择甘草苷作为该制剂的定量指标。　　　　通过参考