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时间:2018-11-10
《槲皮素联合川芎嗪对小鼠lewis肺癌生长的抑制作用》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、槲皮素联合川芎嗪对小鼠Lewis肺癌生长的抑制作用作者:符慧群,李杰平,贺兼斌,张平【摘要】目的探讨槲皮素联合川芎嗪对小鼠Leechanismofquercetinbinationethylpyrazineongroainmice.MethodsTheLeamodelsofC57BLmiceicelydividedinto4groups:controlgroup(GroupA),quercetingroup(GroupB),tetramethylpyrazinegroup(GroupC)andquercetin+tetr
2、amethylpyrazinegroup(GroupD).Differenttreatmentsday2aftertransplantationandallmiceesoftumorseasurerespectivelyduringthetherapytime;subcutaneoustumorsination.Theexpressionofmicrovesseldensity(MVD),proliferatingcellnuclearantigen(PA)andvascularendothelialgromunhist
3、ochemicalmethod.Theapoptosisindex(AI)easuredbybiotinyateddUTPnickandlabeling(TUNEL).Results(1)ThetumorgroorarkedlydecreasedinGroupB,CandDparedethylpyrazinecanremarkablyinhibitthegroainmice,anditsmechanismsmightberelativetoinhibitingtheangiogenesisandtumorprolife
4、ratingandinducingapoptosis. Keyethylpyrazine;Lea;Vascularendothelialgrog/2ml,批号9803161)购于无锡市第七制药厂,丙二醇(分析纯)为重庆东方试剂厂生产,槲皮素购于美国Sigma公司,TUNEL凋亡检测试剂盒、兔抗鼠PA单抗及SABC免疫组化试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司,VEGF兔抗鼠单抗购于美国SantaCruz生物科技公司,CD34兔抗鼠一抗、DAB显色剂均购自福州迈新生物工程公司。 1.2模型制备与分组给药 取接种Lel)
5、1∶3制备匀浆液备用。另取C57BL小鼠(购自中国医学科学院动物繁殖所)40只,雌雄各半,体重18~20g,每只小鼠于右腋皮下接种匀浆液,每只0.2ml,建立小鼠皮下肿瘤动物模型。40只小鼠皮下移植处均成瘤,接种2d后随机分成4组,每组10只。对照组(A组):予丙二醇0.2ml+生理盐水0.2ml腹腔注射,1次/d;槲皮素组(B组):予槲皮素50mg/kg溶于0.2ml丙二醇+生理盐水0.2ml腹腔注射,1次/d;川芎嗪组(C组):予川芎嗪100mg/kg溶于0.2ml生理盐水+丙二醇0.2ml腹腔注射,1次/d;槲皮素
6、+川芎嗪组(D组):予槲皮素50mg/kg溶于0.2ml丙二醇+川芎嗪100mg/kg溶于0.2ml生理盐水腹腔注射,1次/d。各组均连续给药20d,第22d处死全部小鼠进行指标检测。 1.3一般检测 接种前和接种后每2d称1次体重,按体重变化调整给药。接种后每2d测量1次小鼠皮下肿瘤最长径(a)和最短径(b),计算肿瘤体积(V=a×b2/2),绘制肿瘤生长曲线。第22d脱颈椎处死小鼠,完整剥离肿瘤称重,计算抑瘤率,抑瘤率=(1-治疗组平均瘤质量/对照组平均瘤质量)×100%。 1.4HE及免疫组化染色 取肿瘤组
7、织,10%中性甲醛固定、石蜡包理,5μm连续切片,HE染色,光镜观察。采用免疫组化SABC法检测血管内皮生长因子(VEGF)、增殖核抗原(PA)及肿瘤组织微血管密度(MVD)的表达,严格按照试剂盒说明书进行操作,阴性对照用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗。VEGF的判定标准:高倍镜下计数100个细胞,肿瘤细胞胞浆及胞膜中呈棕黄色阳性细胞<10%为阴性,≥10%阳性,采用全自动图像分析系统测定肿瘤组织中VEGF的平均灰度值(灰度值越低,其蛋白质表达越高)。PA结果,以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞,选择阳性细胞密集区
8、域,排除坏死区,每张切片计数10个高倍视野中阳性细胞数及细胞总数,计数增殖指数SPF。MVD的判定标准,凡与临近的肿瘤细胞、微血管或结缔组织分开的,呈棕黄色CD34染色的单个内皮细胞或内皮细胞串计为一个血管,但肌层较厚,或管腔面积>8个红细胞直径的血管不计数。MVD计数参考WEIdner等[4]方法。 1.5
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