硅油小滴对人视网膜色素上皮细胞吞噬活性的影响

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1、硅油小滴对人视网膜色素上皮细胞吞噬活性的影响作者：马丽娜　惠延年　王雨生　张乐　王静波　徐建峰　马吉献【摘要】　　目的：探讨一定大小的乳化硅油小滴能否影响视网膜色素上皮（retinalpigmentepithelial,RPE）细胞的吞噬能力。方法：将硅油挤压通过一种微孔滤膜制成大小相似的小滴。用酞箐蓝标记硅油小滴。培养的人RPE细胞与硅油小滴，伴或不伴有血清，共同孵育24h。被细胞内吞的小滴在显微镜下计数。测量人RPE细胞在体外吞噬硅油小滴的数量。结果：挤压通过这种微孔膜制成的硅油小滴至少稳定5d，硅油小滴的直径为4.25±0.77μm。乳化硅

2、油浓度不同，RPE细胞吞噬硅油小滴的数量有明显剂量依赖性，随浓度增高，吞噬数量也增加。加有血清的硅油小滴使RPE细胞的吞噬能力进一步增强。结论：硅油小滴能刺激RPE细胞的吞噬能力，含有血清时对RPE细胞的吞噬能力有进一步的刺激作用。【关键词】色素上皮　眼　硅油　乳化　吞噬　　EffectsofvesiclesofsiliconeoilonphagocytosisofhumanretinalpigmentepithelialcellsinvitroAbstractAIM:Toinvestigateentepithelial(RPE)cellscan

3、beinfluencedbyemulsifiedsiliconeoildropletsilarlysizedvesiclesofsiliconeoilicro-porefiltermembrane.VesiclesofsiliconeoilonitoredanRPEcellsfor24hours.ThenumbersofthevesiclesengulfedintheRPEcellsicroscope.Themainoutemeasurebersofsiliconeoilinvitro.RESULTS:Extrudingsiliconeoilth

4、roughthemembraneresultedintheproductionofvesiclesthatremainedstableforatleast5days.Themeanvesiclediameter.Vesiclesofsiliconeoilhadadose-dependentinfluenceonRPEcellphagocytosis.Themoretheconcentrationofthevesicles,themorephagocytosisthecellsdid.Phagocytosisofthevesiclesbycultu

5、redRPEcellsulatedbyserumaddedintheculturemedium.CONCLUSION:Theseinvitrodatashoulsified.VesiclesofsiliconeoilcanstimulatetheabilityofRPEcellphagocytosis.Theserumcanfurtherstimulatetheabilityofthephagocytosis.·KEYEM,Gibco,USA)中加入100mL/L新生牛血清（四季青产品）、青霉素（100×103U/L）、链霉素（100×103U/

6、L），培养箱中37℃，50mL/LCO2常规培养，次日更换培养液继续培养。选择3～6代细胞用于实验。将对数生长期的细胞按5×108个/mL密度接种于预置有盖玻片（8mm×8mm）的24孔板中，接种24h后更换培养液，每孔加入2mL培养液。实验分两组，第1组加入DMEM培养液，第2组加入加有100mL/L新生牛血清的DMEM培养液。分别向2组细胞中加入硅油含量为0（10mmol/LPBS液，空白对照），12.5,25.0,50.0mL/L的染色乳化硅油液100μL，常规培养24h，取出爬片，10mmol/LPBS液充分冲洗3次，40g/L多聚甲醛固

7、定0.5h，用吸管吸取多聚甲醛轻轻冲洗爬片上残留硅油小滴3次，10mmol/LPBS液漂洗3次，待测。光学显微镜下观察，每张爬片随机取3个视野，每个视野至少计数50个细胞，用图象采集分析系统(Image－ProPlus6.0)计算细胞内吞的染色硅油小滴来分析RPE细胞对硅油小滴的吞噬作用。每个浓度设3个复孔，重复实验3次。统计学处理：采用数据软件SPSS11.5处理，采用t检验，进行两样本均数比较，以及LSD检验，进行多组样本均数比较，数据表示为。2结果用孔径为0.45μm的微孔膜制得的硅油小滴直径为4.25±0.77μm，硅油小滴可稳定至少5d

8、。酞箐蓝可均匀着染硅油小滴，不溶于PBS，可示踪硅油小滴，分析RPE细胞内吞硅油小滴的情况。培养的RPE细胞固定于玻璃面上，在DMEM组