硅油小滴对人视网膜色素上皮细胞吞噬活性的影响

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时间:2018-11-09

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1、硅油小滴对人视网膜色素上皮细胞吞噬活性的影响作者:马丽娜 惠延年 王雨生 张乐 王静波 徐建峰 马吉献【摘要】  目的:探讨一定大小的乳化硅油小滴能否影响视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelial,RPE)细胞的吞噬能力。方法:将硅油挤压通过一种微孔滤膜制成大小相似的小滴。用酞箐蓝标记硅油小滴。培养的人RPE细胞与硅油小滴,伴或不伴有血清,共同孵育24h。被细胞内吞的小滴在显微镜下计数。测量人RPE细胞在体外吞噬硅油小滴的数量。结果:挤压通过这种微孔膜制成的硅油小滴至少稳定5d,硅油小滴的直径为4.25±0.77μm。乳化硅

2、油浓度不同,RPE细胞吞噬硅油小滴的数量有明显剂量依赖性,随浓度增高,吞噬数量也增加。加有血清的硅油小滴使RPE细胞的吞噬能力进一步增强。结论:硅油小滴能刺激RPE细胞的吞噬能力,含有血清时对RPE细胞的吞噬能力有进一步的刺激作用。【关键词】色素上皮 眼 硅油 乳化 吞噬  EffectsofvesiclesofsiliconeoilonphagocytosisofhumanretinalpigmentepithelialcellsinvitroAbstractAIM:Toinvestigateentepithelial(RPE)cellscan

3、beinfluencedbyemulsifiedsiliconeoildropletsilarlysizedvesiclesofsiliconeoilicro-porefiltermembrane.VesiclesofsiliconeoilonitoredanRPEcellsfor24hours.ThenumbersofthevesiclesengulfedintheRPEcellsicroscope.Themainoutemeasurebersofsiliconeoilinvitro.RESULTS:Extrudingsiliconeoilth

4、roughthemembraneresultedintheproductionofvesiclesthatremainedstableforatleast5days.Themeanvesiclediameter.Vesiclesofsiliconeoilhadadose-dependentinfluenceonRPEcellphagocytosis.Themoretheconcentrationofthevesicles,themorephagocytosisthecellsdid.Phagocytosisofthevesiclesbycultu

5、redRPEcellsulatedbyserumaddedintheculturemedium.CONCLUSION:Theseinvitrodatashoulsified.VesiclesofsiliconeoilcanstimulatetheabilityofRPEcellphagocytosis.Theserumcanfurtherstimulatetheabilityofthephagocytosis.·KEYEM,Gibco,USA)中加入100mL/L新生牛血清(四季青产品)、青霉素(100×103U/L)、链霉素(100×103U/

6、L),培养箱中37℃,50mL/LCO2常规培养,次日更换培养液继续培养。选择3~6代细胞用于实验。将对数生长期的细胞按5×108个/mL密度接种于预置有盖玻片(8mm×8mm)的24孔板中,接种24h后更换培养液,每孔加入2mL培养液。实验分两组,第1组加入DMEM培养液,第2组加入加有100mL/L新生牛血清的DMEM培养液。分别向2组细胞中加入硅油含量为0(10mmol/LPBS液,空白对照),12.5,25.0,50.0mL/L的染色乳化硅油液100μL,常规培养24h,取出爬片,10mmol/LPBS液充分冲洗3次,40g/L多聚甲醛固

7、定0.5h,用吸管吸取多聚甲醛轻轻冲洗爬片上残留硅油小滴3次,10mmol/LPBS液漂洗3次,待测。光学显微镜下观察,每张爬片随机取3个视野,每个视野至少计数50个细胞,用图象采集分析系统(Image-ProPlus6.0)计算细胞内吞的染色硅油小滴来分析RPE细胞对硅油小滴的吞噬作用。每个浓度设3个复孔,重复实验3次。统计学处理:采用数据软件SPSS11.5处理,采用t检验,进行两样本均数比较,以及LSD检验,进行多组样本均数比较,数据表示为。2结果用孔径为0.45μm的微孔膜制得的硅油小滴直径为4.25±0.77μm,硅油小滴可稳定至少5d

8、。酞箐蓝可均匀着染硅油小滴,不溶于PBS,可示踪硅油小滴,分析RPE细胞内吞硅油小滴的情况。培养的RPE细胞固定于玻璃面上,在DMEM组

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