瘦素对人视网膜色素上皮细胞pedf和tnf-α蛋白表达的影响

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1、隶劫大·嘤硕士学位论文瘦素对人视网膜色素上皮细胞PEDF和TNF—Q蛋白表达的影响THEINFLUENCEOFLEPTINTOEXPRESSION0FPIGMENTEPITIIELIUM．DERIVEDFACTORANDTNF．AOFCULTUREDHUMANRETINALPIGMENTEPITHELIALCELLSAThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofClinicalMedicineBYLIYun—yunSupervisedbyProf．LuanJieO

2、phthalmologyDepartmentofZhongdaHospitalSchoolofMedicineSoutheastUniversityMay2013东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生虢姆日期：出、6、乡东南大学学位论文使用授权声明东

3、南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：歪苎笠导师签名：塑三：日期：“?b1

4、>中文摘要瘦素对人视网膜色素上皮细胞PEDF和TNF—Q蛋白表达的影响研究生：李芸芸导师：栾沽教授东南大学医学院【目的】探讨在正常浓度葡萄糖、高糖和胰岛素抵抗状态下，不同浓度的瘦素(Leptin)

5、对人视网膜色素上皮细胞活性以及色素上皮细胞衍生因子(pigmentepithelium—derivedfactor，PEDF)和肿瘤坏死因子一Q(tumornecrosiSfactor-Q，TNF-Q)表达的影响。【方法】体外培养人视网膜色素上皮细胞(culturedhumanretinalpigmentepJthelialcells一19，ARPE一19)，随机分为正常浓度葡萄糖组(含葡萄糖5．6mmol／L)、高糖组(含葡萄糖30mmol／L)和胰岛素抵抗组(30mmol／L葡萄糖+lOOnmol／L胰岛素)：分别以浓度为10ng／mL、100n

6、g／mL及1000ng／mL的瘦素(Leptin)干预12小时、24小时、48小时，用MTT法检测细胞增殖情况：以浓度为10ng／mL、100ng／mL的瘦素(Leptin)分别干预12小时、24小时、48小时，用蛋白免疫印迹法(WesternBlot)检测培养液及胞浆中PEDF、TNF～CI的蛋白表达量。【结果】M，rT法显示：①以Leptin浓度为10ng／mL、100ng／mL分别干预ARPE一19细胞12小时、24小时、48小时后，各组Leptin吸光度值与空白对照组无明显差异(P)O．05)：②当Leptin干预浓度达到1000ng／mL时

7、，分别作用12小时、24小时、48小时，各组吸光度值均低于空白对照组(P<0．01)。蛋白免疫印迹法检测显示：①在所有观察时间(12小时、24小时、48小时)，Leptin(10ng／mL、lOOng／mL)干预的条件下：除正常浓度葡萄糖组12小时、Leptin浓度为lOng／mL时，RPE细胞培养液中分泌的PEDF蛋白表达量较空白组未见明显增多外(P>0．05)外，其余各组RPE细胞胞浆内和培养液中PEI)F蛋白的表达增加，’差异具有统计学意义(P

8、性，随keptin浓度升高，RPE细胞胞浆内和培养液中PEDF蛋白的表达增多。高糖组RPE细胞胞浆内和培养液中PEDF蛋白的表达随Leptin作用时间延长而逐渐减少(P

9、表达与Leptin呈现时间一浓度依赖性(P<0．05，P(O．01)，⋯．．；高糖组RPE细胞培养液中TNF