甲肿消制剂及其含药血清中哈巴俄苷的含量测定

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1、甲肿消制剂及其含药血清中哈巴俄苷的含量测定作者：张秋燕，崔翰明，刘喜明，朱晓芸，白鸽【摘要】目的建立甲肿消制剂及灌胃给予甲肿消后大鼠血清中的哈巴俄苷含量测定方法。方法采用RP-HPLC法测定哈巴俄苷的含量，色谱柱：KromasilC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）和Easyguard保护柱，以乙腈和1％醋酸溶液为流动相，采用梯度洗脱；流速：1ml·min-1；检测波长为278nm；进样量：5μl。结果哈巴俄苷在1.46～146μg·ml-1的浓度范围内线性良好；低、中、高浓度哈巴俄苷的精密度（RSD）(n=5)分别为1.05%，0.59%，0.80%；日间差（RSD）

2、（n=5）为1.00%；制剂和大鼠血清中哈巴俄苷的加样回收率（n=5）分别为（98.02±1.01）%和（101.03±1.64）%；测定其重现性（RSD）（n=6）分别为0.73%和0.96%；每克制剂中含哈巴俄苷的量为230.5μg，每毫升含药血清中哈巴俄苷的量为1.88μg。结论该方法简便、快速、准确、重现性良好，可用于制剂和血清中哈巴俄苷的含量测定。【关键词】哈巴俄苷；甲肿消制剂；固相萃取；反相高效液相色谱ChinaAbstract：ObjectiveTodevelopadeterminationmethodofHarpagosideinJiaZhongXiaoprepa

3、rationandbloodserumofrat.MethodsTheRP-HPLCmethodasilC18column（250mm×4.6mm，5μm）andEasyguardcolumn.Themobilephasel·min-1,anddetection.ResultsAnexcellentlinearityl-1.TheRSDsofaccuracyfor7.3,29.2,146μg·ml-1eanrecoveryratesofHarpagosideinpreparationandseruminationmethodforpreparationandserumrepeat

4、abilityl-1,respectively.ConclusionThemethodissimple,rapid,reliableandrepeatable.It’squitesuitablefortheanalysisofHarpagosideinJiaZhongXiaopreparationandofratserum.　　Keyl-1饮片的浸膏剂。动物和临床试验证明本制剂具有较好的化痰散结、治疗甲亢型甲状腺肿大的作用。处方中玄参具有凉血滋阴、泻火解毒的功效，用于热病伤阴、津伤便秘、目赤、咽痛等症［1］，其含量较高的特征性成分为哈巴俄苷，有抗慢性炎症、降压、镇痛、解痉、抗乙型

5、肝炎病毒和免疫促进等作用［2，3］。因此，我们采用反相高效液相色谱法建立了浸膏和大鼠血清中的哈巴俄苷的含量测定方法，为进一步阐明本方治疗甲亢的机理和控制制剂质量提供分析方法。　　1仪器与材料　　1.1仪器Knaver液相色谱仪、KnaverUVDetecter（德国Knaver公司）；KromasilC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；Easyguard保护柱（迪马公司）；ME215P型电子天平；g，60μm，3ml，瓦里安公司）。　　1.2药品和试剂哈巴俄苷对照品（批号为200501）购自中国药检所；药材购自同仁堂药店；乙腈为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为高纯水。　　

6、2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为KromasilC18柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈和1％醋酸溶液为流动相，采用梯度洗脱，比例见表1；流速：1ml·min-1；检测波长为278nm；进样量：5μl。色谱图结果见图1。表1乙腈：1％冰醋酸流动相梯度表（略）　　2.2甲肿消制剂和大鼠含药血清的制备甲肿消制剂的制备：将玄参、夏枯草等饮片按适当的比例配制，加水煎煮提取，提取液过滤，浓缩得浓度为生药3g·ml-1的浸膏剂。大鼠含药血清的制备：选取体质量（330±20）g的雄性in-1离心10min，吸取上清液，0.22μm滤膜过滤，滤液即为含药血清和空白血清，-20℃冷

7、冻保存。　　2.3甲肿消样品的前处理方法精密称取甲肿消浸膏约2g，用30％甲醇（25，20，20ml）超声提取3次，提取时间分别为30，20，20min，提取液离心10min，转速为3500r·min-1，3次上清液合并，浓缩至微干，再用30％甲醇溶解并定容至25ml，0.45μm滤膜过滤，滤液按“2.1色谱条件”项进行含量测定。　　2.4含药血清中哈巴俄苷的前处理方法将C18SPE柱先用2ml甲醇冲洗，再用2ml水冲洗活化待用；精密移取解冻后的含药血清2ml，上样于处理好的SP