资源描述:
《hplc法测定甲肿消及大鼠血清中土贝母苷甲的含量》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、HPLC法测定甲肿消及大鼠血清中土贝母苷甲的含量作者:崔翰明,程慧平,刘喜明,朱晓芸【摘要】目的建立甲肿消制剂及灌胃给予甲肿消后大鼠血清中土贝母苷甲的含量测定方法。方法采用RP-HPLC法,甲肿消制剂用甲醇萃取,血清样品采用C18SPE固相萃取柱(3mL,200mg,60μm)处理,甲醇洗脱;色谱柱:DiamonsilC18(250mm×4.6mm,5μm)和Easyguard保护柱;流动相:甲醇-水(65∶35),检测波长:214nm,流速:1mL/min。结果甲肿消制剂及大鼠血清中土贝母苷甲的回收率分别为(103.49±3.49)%、(104.70±4.69)%,土贝母苷甲在1.18~88
2、.5μg/mL浓度范围内线性良好。每1g制剂含土贝母苷甲995.3μg,灌胃给予甲肿消后大鼠血清中土贝母苷甲浓度为3.19μg/mL。结论本方法快速、简便、准确,可用于测定制剂及其血清中土贝母苷甲的含量。【关键词】甲肿消;土贝母苷甲;固相萃取;反相高效液相色谱法;含药血清;含量测定Keywords:Jiazhongxiao;TubeimosideⅠ;SPE;RP-HPLC;drugcontainingserum;determination甲肿消处方由夏枯草、土贝母等组成,按适当工艺制成浓度为37g/mL原药材的浸膏剂。动物和临床试验证明,该制剂具有较好的化痰散结、治疗甲状腺功能亢进型甲状腺肿大
3、的作用。但其作用途径与机理尚不清楚,故我们采用血清药理学的方法,观察本制剂大鼠灌胃给药后的含药血清对甲状腺细胞增殖的影响,以阐明本方治疗甲状腺功能亢进的机理。土贝母为葫芦科植物土贝母[Bolbostemmapaniculatum(Maxim.)Franquet]的干燥块茎,有散结、消肿、解毒之功效。从中分离出的土贝母苷甲是其主要有效成分,具有抗肿瘤、抗病毒、免疫抑制等多种活性[1]。因此,我们采用RP-HPLC法建立了大鼠含药血清中的代表性成分土贝母苷甲(土贝母)的含量测定方法,为进一步阐明本方治疗甲状腺功能亢进的机理提供分析方法。 1仪器与试药LC-10A高效液相色谱仪和SPD-10A紫外
4、检测器(日本导津公司);XW-80A涡旋混合器;PHS-25型酸度计;TGL-16g台式高速离心机;ME215P型分析天平(Sartorius);DiamonsilC18分析柱(250mm×4.6mm,5μm);Easyguard保护柱(迪马公司);固相萃取小柱(C18SPE,200mg,3mL,瓦里安公司)。体重(330±10)g的雄性Wister大鼠(中国医学科学院动物中心,合格证号:SCXK-2005-0013)。夏枯草、土贝母等药材购自燕京饮片厂,由本院药理实验室鉴定,符合2005版《中华人民共和国药典》标准;土贝母苷甲(批号1536-200001)对照品由中国药品生物制品检定所提供。
5、甲醇、乙腈等试剂均为色谱用;水为高纯水。7 2方法与结果 2.1含药血清的制备 2.1.1甲肿消制剂的制备 按处方量配制,水煎煮提取,过滤,滤液减压浓缩后得浓度为每毫升相当于3g原药材的浸膏剂。 2.1.2大鼠含药血清的制备 选取体重(330±10)g的雄性Wistar大鼠30只,其中20只按体重5mL/kg的剂量灌胃给予甲肿消浸膏剂,10只按体重给予同剂量生理盐水,每天2次,连续7d。末次灌胃后开始计时,于60min后,用玻璃毛细管自乙醚麻醉大鼠眼底采血,收集血样于离心试管中,放置2h促凝,1500r/min离心10min,吸取上清液,0.22μm滤膜过滤,滤液即为含药血清和空白
6、血清,-20℃冷冻保存。 2.2甲肿消和大鼠含药血清中土贝母苷甲的含量测定 2.2.1甲肿消样品的前处理7 精密称取甲肿消浸膏约3g,分别用甲醇(15、15、10mL)超声(300W,55kHz)提取3次,每次5min,0.45μm滤膜过滤,合并滤液,加甲醇定容至50mL。精密量取10mL,减压除去溶剂,残渣精密加入甲醇2mL,超声溶解,0.45μm滤膜过滤,取续滤液作为含量测试试液。 2.2.2血清样品中土贝母苷甲的前处理 冻存血清于室温解冻备用。选取C18SPE柱(200mg,3mL,60μm),先用2mL甲醇冲洗,再用2mL纯水冲洗活化;精密量取血清1mL上样,弃去流出液,用2
7、mL纯水冲洗,再用1mL甲醇洗脱,收集甲醇洗脱液作为供试液。 2.2.3色谱条件 色谱柱:DiamonsilC18(250mm×4.6mm,5μm)和Easyguard保护柱;流动相:甲醇-水(65∶35);流速:1mL/min;检测波长:214nm;进样10μL。色谱图见图1。 2.2.4标准曲线的测定 精密称取土贝母苷甲标准品11.8mg,用65%甲醇配成浓度为118μg/mL的标准溶