甘油二酯激酶ζ参和大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎进程

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1、学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本文独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：逊短。函日期：型!

2、三年—鱼月—互日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：三箜盈叠指导教师签名：j芦丝处同期：为，1年6月-7日F

3、期：卫年』月乒日(本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何

4、个人不得擅自使用)目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯I英文摘要．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．III前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．2一、免疫抗原制备、EAE动物模型建立、标本取材和制备．．．⋯⋯⋯2二、免疫蛋白印迹⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯3三、免疫组织化学染色⋯．⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯．⋯⋯．⋯⋯⋯3四、免疫荧光双标染色．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯4五、统计学处理⋯．．⋯．．．．．．．．⋯．．。．．．．⋯⋯．⋯．．．．．．⋯⋯4结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．6三

5、日术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．一、DGK<和耵师O【的免疫蛋白印迹测定⋯．，．．⋯．．．．．．．．．⋯．．⋯6二、Ibal、DGK<和TNF仅在脑干和脊髓的表达及分布变化⋯⋯⋯⋯6讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．9一、DGK<在脑干和脊髓的表达变化⋯．．。⋯．．⋯．．．．．．．．．⋯．．．．．9二、TNFcl在脑干和脊髓的表达变化及其与DGK(的关系⋯⋯⋯⋯10小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。⋯⋯⋯⋯⋯⋯l1参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．15山西医科大学硕士学位论文甘油二酯激酶<

6、参与了大鼠实验性自身免疫性脑脊髓膜炎进程摘要目的：甘油二酯激酶(diacylglycerolkinase，DGK)通过磷酸化甘油二酯(diaCyl91ycerol，DAG)为磷脂酸(phosphatidicacid，PA)调节细胞的生理病理活动；肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor0【，TNFa)是促炎症细胞因子，参与炎症反应。本实验建立大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE)模型，检测DGK‘和TNFtx在脑干和脊髓的蛋白水平、细胞定位和分布的变化，探讨DGK‘在EAE发病机制中

7、的作用，为临床治疗多发性硬化症提供新方法。方法：应用豚鼠脊髓匀浆诱导Wistar大鼠EAE模型，用免疫蛋白印迹法、免疫组织化学和免疫荧光双标技术检测DGK‘和TNFc【在EAE不同病理阶段中脑干和脊髓内的蛋白水平、细胞定位和分布变化。结果：1．免疫蛋白印迹结果显示：DGK(∈和TNF(1在EAE大鼠脑干和脊髓中的表达变化均为：在1．2分组表达量均显著低于正常组(P<0．05)，在3分组又显著升高(PO．05)。2．免疫组化和免疫荧光双标结果显示：(1)在正常组大鼠脑干和脊髓DGK<均主要在神经元的细胞核阳性表达。在

8、1分和2分组，脑干和脊髓中DGK‘阳性细胞数量明显减少，但在3分和4分组DGK(在神经元的表达又增多，并且在大量活化的小胶质细胞呈阳性表达。在正常和各病理组大鼠脑干和脊髓中，DGK‘在脑干纤维状结构均呈弱阳性表达，但在脊髓白质表达较强。(2)TNFa在正常组大鼠脑干呈阳性表达在细胞浆，纤维状结构也呈阳性表达；在1分和2分组脑于内，TNFat阳性细胞减少，仅表达在细胞核周；在3分和4分组脑干中TNFa表达又增强，呈强阳性表达在胞核中，且阳性细胞数量明显增多，纤维状结构均呈阳性表达。在正常组和各病理组大鼠脊髓白质和灰质