il12和il10与实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠发病的相关性

《il12和il10与实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠发病的相关性》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、IL12和IL10与实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠发病的相关性：檀国军,徐玉,王秀丽,朱一飞,刘静,郭力【摘要】目的:探讨IL12及IL10与实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠发病的相关性。方法:以豚鼠全脊髓匀浆与福氏完全佐剂为抗原免疫S)是临床常见的中枢神经系统(centralnervoussystem,S)炎性脱髓鞘的自身免疫性疾病。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE)是CD4+T细胞介导的S自身免疫性脱髓鞘疾病,是MS的经典动物模型。目前MS的发病机制尚

2、不清楚,Karpus等［1］认为与Th1/Th2失衡有关。研究表明,Th1与Th2类细胞因子(cytokine,CK)的表达分别与EAE病情进展和缓解相关［2］。本研究通过观察EAE大鼠血清中IL12、IL10水平变化,目的在于探讨IL12及IL10与EAE发病的相关性,以期为深入了解MS的发病机制、探索新的有效治疗途径和病情的监测提供理论依据。1材料和方法1.1材料雌性a公司;IL12、IL10双抗体夹心ELISA试剂盒购自上海森雄科技实业有限公司。1.2方法1.2.1动物分组法将健康、雌性alsaline,NS)对照组:18只,仅注

3、射NS,分组同CFA组。1.2.2完全抗原的制备健康350～400g雌性豚鼠5只用100g/L水合氯醛350mg/kg腹腔注射至四肢瘫软,迅速取其全脊髓。按1g脊髓∶1mLNS在冰槽中用超声细胞粉碎仪制成500mL/L的豚鼠全脊髓匀浆(guineapigspinalcordhomogenate,GPSCH),与等量含4g/L卡介苗的CFA充分混合至油包水乳剂,制成完全抗原。1.2.3建立EAE大鼠模型及临床评分EAE组经大鼠四肢足垫皮下注射抗原匀浆0.4mL/只,佐剂组为CFA代替抗原匀浆同法注射,正常对照组皮下均注射NS。记免疫当日为第0天,进行

4、临床症状评分,参照Kono等［3］提出的标准,分为5级:Ⅰ级动物尾部无力;Ⅱ级尾部无力+肢体无力;Ⅲ级肢体轻度麻痹;Ⅳ级肢体严重麻痹,被动翻身后不能复原;Ⅴ级濒死状态。1.2.4组织病理学检查所有动物于免疫后在不同的时间点处死,留取血清,麻醉后先以NS左心室冲洗,再用40g/L多聚甲醛灌注固定,切取大脑视交叉层面2mm脑组织、小脑、脑干、颈膨大、胸段及腰膨大脊髓固定于40g/L多聚甲醛中,石蜡包埋切片,行HE染色。1.2.5ELISA检测血清IL12、IL10水平的表达,用双抗体夹心ELISA检测。1.2.6统计学分析采用SPSS11.0统计软

5、件进行统计分析,数值用x±s表示,单因素多组比较用方差分析,两组之间比较用t检验,症状评分间比较用相关分析。2结果2.1EAE大鼠的发病情况EAE组大鼠免疫后出现精神萎靡、食欲减退、皮毛不光滑,自第10天开始发病,症状表现为不同程度的尾部张力消失、无力;第14天进入发病高峰,EAE组动物全部发病,发病率为100%,此期症状最严重,双后肢甚至四肢无力、麻痹,大小便失禁,一只动物因病情严重而死亡,平均症状评分3.88±0.68;至第21天动物症状缓解,体质量也逐渐恢复(图1)。CFA组和NS组大鼠没有发病,状态及体质量无明显变化。2.2病理组织学检查E

6、AE组发病大鼠脑脊髓组织HE染色可见,在其发病早期S内有单核淋巴样细胞散在浸润;发病高峰期S内大量的单核淋巴样细胞浸润,尤其在小血管周围形成典型“袖套样(cuffing)”改变(图2),提示血脑屏障(bloodbrainbarrier,BBB)被严重破坏;缓解期S内单核淋巴样细胞浸润程度明显减轻。病变累及部位涉及大脑、小脑、脑干、脊髓等,以白质为主。CFA组和NS组大鼠脑和脊髓均未见异常。图1EAE大鼠免疫后临床症状评分图2血管套袖样改变(HE,×400)2.3血清IL12水平的变化EAE组血清中IL12在潜伏期(注射后7d)上调,随着EA

7、E大鼠进入症状高峰期(注射后14d),IL12水平亦达高峰,恢复期(注射后21d)IL12水平下降,EAE组在注射后7、14和21d血清中IL12水平分别为(11.407±0.208)ng/L、(28.108±0.028)ng/L和(14.456±0.259)ng/L。EAE组3个时间点IL12水平与对照组相比均有统计学意义(P<0.01);其症状高峰期(注射后14d)IL12水平与潜伏期(注射后7d)及恢复期(注射后21d)相比有统计学意义(P<0.01,图3)。CFA组与NS组在相应时间血清中IL12水平比较无统计学意义

8、(P>0.05)。图3EAE组与CFA组、NS组注射后7～21d血清中IL12水平比较bP<0.01vsCF