丝裂霉素对人胃癌细胞谷胱甘肽转移酶表达的影响

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1、丝裂霉素对人胃癌细胞谷胱甘肽转移酶表达的影响　　【关键词】丝裂霉素；胃癌；谷胱甘肽转移酶；免疫组织化学　　【ABSTRACT】Objective：TostudythekillingfunctionofmitomycinongastriccancercellsandtheexpressionofGSTπ.Methods:Ashumangastriccancercellsitomycinicroscopeandtransmissionelectronmicroscopeafterstainingmunohistochemicalmethod

2、.Results:Themorphologyofgastriccancercellembraneandnuclear.Conclusion:Mitomyclinhasakillingfuctiontogastriccancercells,oneofmannersycin;Gastriccancer;GSTπ;Immunohistochemicalmethod化学治疗是对恶性肿瘤综合性治疗的一部分，丝裂霉素是临床常用的抗癌药之一，其作用效果临床已有报告，而对其作用途径，尤其是它对重要酶系的影响，尚未见报告。本实验采用细胞培养技术和免疫组织

3、化学技术，观察丝裂霉素（Mitomycin,MMC）对胃癌细胞谷胱甘肽转移酶（胎盘型，简称GSTπ）的影响，为探讨丝裂霉素的抗癌机制提供科学依据。　　1材料和方法　　11材料丝裂霉素注射液（Mitomycinforinjection）由浙江省海正药业股份有限公司生产（批号040901）。BGC823胃癌细胞株由北京肿瘤研究所提供；二氧化碳培养箱和RPMI1640培养液由实验中心提供。兔抗人GSTπ抗血清及SP试剂盒由北京中山生物技术公司提供。　　12方法将5×104浓度的BCG823细胞接种于无菌96孔板和6孔板中，培养24h。在6孔板

4、中加入无菌盖玻片，使癌细胞附壁生长（爬片）。对照组不加入药物，实验5h组，即加入MMC15μl(00075mg),培养5h后收获，实验10h组则加药后培养10h。然后将培养液中细胞离心，25%戊二醛前固定。将附壁爬片的癌细胞培养液中分别加药5h、10h后取出盖片，用4%多聚甲醛固定，常规洗涤和SP免疫组织化学染色。其操作程序按试剂盒说明书进行。阴性对照PBS代替Ⅰ抗，阳性对照为已知人胃癌组织切片。　　13统计学处理利用彩色图象分析仪软件进行图象分析。每组随机计数100个癌细胞，以灰度表示着色深浅（深者灰度值低，浅者灰度值高）。借助SPS

5、S软件进行方差分析，然后进行独立样本t检验。　　2结果　　免疫组化染色，GSTπ阳性物质呈棕黄色或黄色，分布在癌细胞质或少数细胞的核与质中，用药5h组胞核与胞质阳性物质均减少（见表1），其灰度升高（表示着色浅），并与对照组有显著性差异（P<001）。10h组生存细胞减少，只有生命力强代谢旺盛的部分细胞仍存活，所以这些细胞仍含GSTπ，但是与对照组相比含量减少。　　表1丝裂霉素对胃癌细胞GSTπ表达灰度的影响（略）　　注：△与对照组比较有显著性差异（P<001）　　3讨论　　丝裂霉素（Mitomycin或Mutamycin,M

6、MC）是抗癌抗生素类药物，是由轮生链霉菌培养液中提取的有效成分，其分子为C15H18N4O5［1］。临床上用于胃癌、肺癌、乳腺癌、肝癌和肠癌等化学治疗。为细胞周期非特异性药物，对G1晚期和S早期细胞更为敏感。本药进入体内在还原酶的作用下或体外其它途径作用下发生活化，活化后MMC才能够和DNA交叉联结或断链反应，改变DNA分子中的信息密码，从而抑制DNA复制，同时对RNA和蛋白质合成也有一定抑制作用［2，3］。本实验观察MMC对GSTπ基因表达的干扰作用主要是因为GST是一种具有多种生理功能的蛋白质，具有过氧化物酶和异物酶特性［3，4］，

7、其主要功能：①它能够催化机体内有害物特性化合物与谷胱甘肽相结合；②它可以由非酶结合方式将体内各种潜在毒性化合物、致癌剂及亲脂性化合物从体内排除，从而达到解毒功能；③参与机体抗氧化和保护细胞内许多物质合成、存储和运转过程，如：对某些激素和胆红素转运和结合等。④抑制丝原活化蛋白激酶和细胞外信号调节激酶活性，从而阻断细胞凋亡途径［5］。机体受到外源性刺激诱导细胞癌变的过程中，GST也是呈高表达现象，如过去我们曾检测胃、肠癌，食道癌和乳腺癌时发现［6~8］，正常胃肠、食道和乳腺组织GST是低表达状态，癌变后GST在癌组织中是呈高表达现象，GST

8、在上述癌组织中阳性率分别为：大肠癌684%、乳腺癌6170%、胃癌625%。本实验表明BGC823胃癌细胞中GSTπ也呈阳性表达，对照组细胞质着色深度略低于细胞核着色深度（见表1，色浅者数值大），丝裂霉素作