eb病毒、幽门螺杆菌caga和vaca基因型感染

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1、EB病毒、幽门螺杆菌cagA和vacA基因型感染【摘要】目的探讨EB病毒，H.pyloricagA基因、vacA基因在胃癌发生发展中的作用及三者关系。方法以病理活检确诊的胃癌病人为实验组（46例），癌前病变（包括肠化生、萎缩性胃炎、非典型增生等）病人对照组（43例），胃镜下取胃癌组织，采用PCR体外扩增方法，检测胃癌组织及癌前病变组织中EBV-DNA，用快速尿素酶试验检测HP，阳性病人做PCR体外扩增，并用PCR法进行H.pyloricagA和vacA基因检测，进行基因分型。结果（1）对照组2例，阳性率为4.6％（2/43）；实验组10例，阳性率为21.7％（10/46）。实验组与对照组差

2、异有统计学意义（P<0.05）。EBVaGC（EBVassociatedgastriccarcinoma,EBVaGC)和EBVnGC(EBVnegativegastriccareinoma，EBVnGC)在年龄、病理类型方面差异无显著性（P>0.05）；在性别方面差异有统计学意义，男性EBV阳性率高于女性(P<0.05)。（2）等级统计分析表明，EBV感染与慢性胃炎→萎缩→肠化生→高中低分化胃癌演变过程中呈正相关（r=0.25465，Ｐ=0.0160）。（3）实验组H.pylori感染率60.9%（28/46），对照组H.pylori感染率37.2%（16/43）,实验

3、组与对照组差异有统计学意义（P<0.05）。（4）慢性浅表性胃炎、萎缩、肠化生、胃癌各组织中H.pylori与cagA和vacA表达均呈正相关（P<0.01）。（5）H.pylori、H.pyloricagA、vacA阳性和阴性在性别、年龄差异无显著性（P>0.05），但在病理类型方面H.pylori、cagA、vacA阳性和阴性有统计学差异（P<0.01.）。（6）相关性分析表明EBV感染与H.pyloricagA呈正相关(P=0.0287,r=0.23199)，与H.pylorivacA无相关性(P=0.8094,r=0.02595)。结论（1）EBV感染与胃癌

4、的发生发展有一定相关性，EBVaGC好发于男性，EBV感染与慢性胃炎→萎缩→肠化生→胃癌演变过程中呈正相关。但EBV感染与胃癌病人年龄、病理类型、无明显相关性。（2）H.pylori感染与胃癌的发生密切相关，H.pylori感染与胃癌的临床病理类型相关，但H.pylori感染与胃癌病人性别、年龄无明显相关性。（3）胃癌发生中EBV感染和cagA的表达呈正相关，与vacA无明显相关性。【关键词】EB病毒幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A空泡细胞毒素基因A胃癌EB病毒(EpsteinBarrVirus，EBV)是最早发现的与人类肿瘤存在明显病因关系的病毒，有学者报道EBV感染与胃癌之间有一定的关系

5、［1～4］，近年来生物因素在胃炎和胃肿瘤发病中的作用受到了普遍的关注。作为生物致癌因素的幽门杆菌(H.pylori)和EBV其与胃癌的关系的研究也逐渐得到人们的重视。EBV能在体内外感染B淋巴细胞，使之转化为永生性细胞系，因而与多种淋巴系统恶性肿瘤的发生密切相关。近年来研究发现胃癌组织中有EBV基因组的存在，且可见于各种病理类型的胃癌如高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌和印戒细胞癌等，因此EBV感染与胃癌的发生发展可能存在某种相关性。Hp是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病因，与胃癌发生密切相关［5～7］,故1994年p公司），哥伦比亚琼脂基础(ColumbiaAgarBase，CAB);（1）

6、幽门螺杆菌快速尿素酶检测试剂购自珠海珠信生物制品有限公司；(2)DNAmarker1(大连几KaRa公司)；（3）DNA酶、TaqDNA聚合酶、dNTP、EtBr(美国Promega公司);（4）引物上海生工生物工程技术服务有限公司合成。　　1.2实验方法　　1.2.1EB病毒的检测EB病毒上游引物5′ATGCCTACGGACCAGACT3′,下游引物5′CCACCAAACACCCACTCA3′EBVPCR反应液12.5μl，Taq酶1μl，上下游引物各1μl，ddH2O8.5μl,混匀后稍加离心，滴入2滴消毒液体石蜡油94℃预变性2分钟，再按94℃30秒、55℃30秒、72℃60秒扩增

7、35个循环。后取15μl反应液，经2%琼脂糖凝胶电泳30分钟后316bp处出现呈黄色调带，则EB病毒为阳性。　　1.2.2细胞毒素相关基因A(cytotoxinassociatedgeneA。cagA)和空泡细胞毒素基因A(vacuolatingcytotoxingeneA，vacA)的检测采用PCR法．cagA引物序列：引物1cagA:上游引5′ACCCTAGTCGGTAATGGG3’下游引物:5′GCAATTTTGT