血清caga抗体鉴定幽门螺杆菌高毒株感染的评价

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1、血清CagA抗体鉴定幽门螺杆菌高毒株感染的评价【摘要】目的评价通过检测血清CagA抗体鉴定幽门螺杆菌高毒株感染的可行性。方法采集福州地区临床门诊行胃镜检查的胃活检标本,行病理检查和幽门螺杆菌(Hp)培养;采集病人血清,PCR法检测分离所得的HpcagA基因;EiA法测定血清CagA抗体,分析cagA基因的检出与消化性疾病的关系,比较CagA基因与CagA抗体的检测结果,评价应用CagA抗体检测Hp高毒株感染的可行性。结果分离获得80株Hp,其中54株检出cagA基因,阳性率67.50%。各病理类型胃病患者cagA基因阳性率:浅表性胃炎7

2、7.42%,萎缩性胃炎62.86%,胃溃疡58.33%,胃癌50.00%,各组间差别无统计学意义(P>0.05);CagA抗体阳性率55.00%,敏感度74.07%,特异度84.62%,约登指数58.69%,调整一致性77.68%。结论检测血清CagA抗体用于诊断高毒力Hp感染存在局限性。【关键词】螺杆菌幽门细胞毒素类抗体细菌免疫酶技术幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)是引起慢性胃炎、消化性溃疡等疾病的主要病因,并与胃癌、MALT淋巴瘤的发生密切相关。Hp感染呈全球分布,人群感染率高。Hp感染后是否导致炎症以

3、及溃疡的发生与其毒力因子密切相关,进行高毒力菌株的鉴定对于临床诊断及是否需要进行Hp根除性治疗具有极其重要的指导意义。cagA是Hp主要毒力基因之一,与慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌的发生密切相关[1]。CagA抗体的检测是否能够应用于临床检测高毒力菌株的感染,从而反映消化性疾病的发生及其严重程度,目前尚无定论。笔者采集胃活检标本,作病理检查和Hp培养,检测HpcagA基因和患者血清CagA抗体,分析cagA基因的检出与消化性疾病的关系,评价应用CagA抗体检测Hp高毒株感染的可行性。1材料与方法1.1材料1.1.1标本2005-2006年

4、收集福建医科大学附属第一医院和附属协和医院门诊行胃镜检查患者活检胃组织标本和血清标本。活检标本取胃窦部黏膜组织,1份送病理室作病理检查,1份置于布氏培养液0.5mL中用于细菌分离培养。外周静脉血5mL离心收集血清,分装后-20℃保存备用。1.1.2标准幽门螺杆菌菌株标准菌株HpNCTC11637(中国疾病预防控制中心传染病研究所)。1.1.3HpcagA和16srRNA引物设计根据GenBank公布的HpcagA和16srRNA序列,经同源性分析,以VectorNTI9.0软件设计cagA开放读码框架内引物CF/CR和16srRNA引物

5、16F/16R,引物由上海博亚生物技术有限公司合成。引物序列如下:cagACF:5’ATAATGCTAAATTAGACAACTTGAGCGA3’CR:5’TTAGAATAATCAACAAACATCACGCCAT3’16srRNA16F:5’GTCATGACGGGTATCC3’16R:5’ACTTCACCCCAGTCGCTG3’1.1.4主要试剂盒快速尿素酶检测试剂盒(三明三强生物化工有限公司)。CagAHpIgGEIAKit试剂盒(上海晶莹生物技术有限公司)。1.1.5主要仪器设备厌氧工作站(BugboxMicroaerophil

6、icSystem,英国Ruskinn公司)。1.2方法1.2.1细菌分离培养及鉴定取胃镜活检组织用匀浆器磨碎,涂布于含5％脱纤维兔血的布氏培养基上,置于厌氧工作站中37℃微需氧饱和湿度环境(5%O2,10%CO2,85%N2)下培养3～5d。培养产物经快速尿素酶试验、涂片染色镜检初步鉴定。1.2.2模板DNA制备初步判断为幽门螺杆菌者,刮取细菌置灭菌双蒸水50μL中,100℃水浴10min,8700r/min离心5min,取上清,-20℃保存备用。1.2.3Hp临床分离菌株16srRNA基因PCR鉴定将初步鉴定为幽门螺杆菌的临床分离株D

7、NA进行16srRNA基因PCR检测,阳性者确定为幽门螺杆菌。PCR反应体系:PCR反应总体积25μL,包括10×PCR缓冲液2.5μL,dNTP(10mmol/L)0.5μL,上游引物16F0.75μL,下游引物16R0.75μL,模板5μL,PfuDNAPolymerase(2.5U/μL)0.5μL,高压灭菌双蒸水15μL。反应程序:94℃5min→(94℃30s,55℃30s,72℃1min)×40→72℃5min。1.2.4Hp临床分离菌株cagA基因PCR检测PCR反应体系:PCR反应总体积25μL,包括10×PCR缓冲液2

8、.5μL,dNTP(10mmol/L)0.5μL,上游引物CF0.75μL,下游引物CR0.75μL,模板DNA5μL,PfuDNAPolymerase(2.5U/μL)0.5μL,高压灭菌双蒸水15μL。