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《猪传染性胸膜肺炎放线杆菌参考株抗血清的制备及野毒株血清型鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、中国兽医学报$’’-年4月第$-卷第2期~!=>"#F<$;=N[%$’’-x0/X$-d0X2$4%猪传染性胸膜肺炎放线杆菌参考株抗血清的制备及野毒株血清型鉴定陈本龙!崔治中"!刁有祥!姜世金#山东农业大学动物科技学院!山东泰安$%&’&()摘要*将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌全部&$个血清型的国际参考菌株接种于培养基大量培养!回收菌体+甲醛灭活后!加入蜂胶佐剂制成疫苗!分别免疫健康的试验用白兔!获得针对该菌单一血清型的抗血清,虽然不同血清型间有一定的交叉反应!但对同源菌株的菌体抗原的凝集效价最高!分别可达-.(个/01$,用该套血清对$’’2年从山东省各地分离到的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌野毒
2、株&&株进行了血清型鉴定!分别为2型#$株)+3型#&株)+4型#3株)和%型#3株),关键词*猪5胸膜肺炎放线杆菌5抗血清5血清型鉴定中图分类号*6(4$7-&文献标识码*8文章编号*&’’493434#$’’-)’29’$4%9’$猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌"通讯作者!kQ/*’42(9($3&4-’5l9R[g/*mmgopq[nXQqnXh#:;<=>?@A;=BBCDEBFCG?E>FCH?>=AF!8II)引起的猪的呼吸道&$’’’WbRgh离心回收菌体!弃上清液!重新用灭菌生理盐水疾病,8II共有&$个血清型!并且在某些血清型之间存在着重悬菌体,然后取一部分加入
3、蜂胶佐剂#由滨州畜牧兽医研究交叉反应!给该病诊断带来很大的难度J&K,该病于上世纪(’所提供)!制成蜂胶灭活疫苗#细菌数为-’.%’亿bRc),年代在我国开始流行J$KL7r动物免疫及抗血清的制备!近年来流行呈上升趋势,本研究应用全部&$个血清型的国际参考菌株!制备了针对单一血清型菌LXrXL免疫方法采用$种途径同时免疫白兔,用蜂胶灭活株的抗血清!对从山东省不同地区分离的8II野毒株进行了疫苗皮下注射免疫白兔!同时用生理盐水重悬的细菌悬液耳血清型鉴定!为该病的预防控制和诊断治疗奠定了一定的基静脉注射免疫白兔,础,LXrX^免疫程序首免!每只兔皮下注射蜂胶灭活疫苗&X4Rc#细菌数为&’’亿个
4、)!同时耳静脉注射细菌悬液’X&Rc&材料与方法#细菌数为&’亿个),首免2周后二免!二免剂量+免疫方式同首免,二免$周后!采少量血制备血清,接着进行三免!三免剂L7L参考菌株8II全部&$个血清型国际参考株分别是*量+免疫方式同首免,三免$周后!大量采血#心脏采血)!隔2&型为3’%3株!$型为M$$-株!2型为&3$&株!3型为N&-株!4型为O&%株!-型为PQRS株!%型为TP(2株!(型为.4q后再次采血,回收全部血液!以便获得尽可能多的抗血清,3’4株!U型为M6&&&株!&’型为V&2’2U株!&&型为M6&&4!LXrX_抗血清的处理和保存采集的血液经2%e静置几小4&-42
5、株!&$型为&’U-株!均由澳大利亚动物研究所VWXIX时!然后以&’’’’WbRgh离心!获得抗血清!向其中加入叠氮YXZ/[][//提供,钠#’X’&a)防腐剂!s$’e保存,L7^培养基牛心脑浸汁液体培养基+普通营养琼脂培养基!均按常规方法配制,LXrX‘抗血清效价的测定通过试管凝集试验对制备的全部&$种抗血清的效价进行测定,将抗血清按$的倍数用生理L7_实验用动物健康实验用白兔!购自山东农业科学院畜盐水依次稀释!同时也将生理盐水重悬的相应菌体抗原按$牧研究所!未注射任何疫苗,的倍数依次稀释,不同稀释度的抗原分别与各稀释度的抗血L7‘菌株培养取真空冷冻保存的8II菌种!平皿划线法清进
6、行试管凝集试验,最后确定作为抗原!细菌数约为&’亿接种于含有4a灭能牛血清和&4R1bcd8V#烟酰胺腺嘌呤个bRc,用此稀释度的抗原与不同稀释度的抗血清作试管凝二核苷酸)的普通营养琼脂固体培养基!2%e培养$3f,然后集试验测定其效价,再挑单个菌落!接种于含有&4R1bcd8V的牛心脑浸汁液体培养基中!2%e+&’’WbRgh摇床震荡培养3(f,L7t抗血清与不同抗原之间的交叉反应测定在测定了抗血清的效价之后!对每个血清型的抗血清同样按$的倍数依在对数生长中期!取牛心脑浸汁液体培养基培养的8II次稀释为$234-%(菌&Rc!先做4倍稀释!然后再按&’’倍梯度稀释的方法将+$+$+$+$+
7、$!然后每个稀释度的抗血清分别与全部&$个血清型的菌体抗原进行试管凝集试验!以检测不菌液稀释到4’’万倍,将稀释后的菌液取$’’ic涂布于含有同菌株的抗血清在不同的浓度时与其他血清型菌体抗原之间4a灭能牛血清和&4R1bcd8V的普通营养琼脂固体培养的交叉反应,基的玻璃平皿上!每种血清型的参考株分别涂2个平皿!2%e培养$3f后计数菌落!最后取平均值!计算得到用牛心脑浸L7uvww野毒株的血清型鉴定从山东省#
