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1、猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白型的研究山东农业科学2011,3:103～105ShandongAgriculturalSciences猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白型的研究骆延波,刘霞¨,黄迪海,张从敬,刘晓飞,张华,徐秀荣',张再辉(I.山东省健牧生物药业有限公司,山东济南250100;2.莱州市畜牧兽医站,山东莱州261400)摘要:对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)12个血清的外膜蛋白型进行了测定.用N一十二烷酰肌氨酸法提取其主要外膜蛋白(OMPs),经SDS—PAGE电泳后,用考马斯亮兰法进行染色,结果APP12个血清型的OMP可以分为6个OMP型,表明APP的OMP具有多样性.关
2、键词:胸膜肺炎放线杆菌;外膜蛋白型;SDS—PAGE中图分类号:$852.619文献标识号:A文章编号:1001—4942(2011)03一(,1n3—03StudyonOuterMembraneProteinPatternsofActinobacilluspieuropneumoniaeLUOYan—bo,LIUXia',HUANGDi—hai,ZHANGCong—jing,LIUXiao—fei,ZHANGHua,XUXiu—rong,ZHANGZai—hui(1.ShandongJianmuBZPharmaceuticalCo.,Ltd.,J/nan250100,China;2
3、.LaizhouAnimalHusbandryBureauofShandongProvince,Laizhou261400,China)AbstractTheoutermembraneproteins(OMPs)oftwelveserotypesofActinobacilluspleuropneumoniae(APP)wereextractedandroughlypurifiedbyN—Lauroylsareosine.AfterSDS—PAGEandstainedbyCom—massiebrilliantblue,theyweresemtypedtosixpatterns,whic
4、hindicatedtheOMPmultiformityofAPP.KeywordsActinobacilluspleuropneumniae;Outermenbraneproteinpattern;SDS—PAGE猪传染性胸膜肺炎(Porcinecontagiouspleu—ropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacil-luspleuropneumoniae,APP)引起的以胸膜肺炎和出血性坏死性肺炎为特征的一种高度传染性和致死性的呼吸系统疾病.APP引起猪致病有几个毒力因素,包括荚膜多糖(CP),脂多糖(LPS),外膜蛋白(OMP),转铁结合蛋白(Tbp)
5、,蛋白酶,渗透因子(PF)及溶血素(Hly)等.小鼠进行免疫保护试验表明,任何一种单一的抗原,包括溶血素在内以及CP,LPS和OMP都只能提供部分的保护力,而不能诱导完全的保护.研究显示外膜蛋白除上述免疫保护作用外,还在猪白细胞的吞噬作用中起调理作用¨.OMP型是由主要OMPs及其差异决定的.主要OMPs的亚单位在SDS—PAGE中的分子量为29,39,50,76ku[2],分别为质粒编码蛋白(plasmidencodedproteins,PCP),ompA蛋白(ompAproteins),K蛋白(Kproteins)和微孑L蛋白(por-ins)3..根据是否依赖NAD可将APP分
6、为两个生物型:生物I型和生物Ⅱ型.根据APP的荚膜抗原和细菌脂多糖的不同,又将生物I型分为l2个血清型(生物1型～生物l2型).目前,国内对APP的这12个血清型外膜蛋白的研究还未见报道,笔者对其进行了初步的研究.1材料与方法1.1菌株与培养基收稿日期:2010—10-09基金项目:山东省农业科学院2007年青年基金支持项目.作者简介:骆廷波(1973一),男,副研究员,现从事预防兽医学研究及新兽药研制工作.E—mail:luoyanbosaas@163.com+通讯作者l04山东农业科学2011年猪传染性胸膜肺炎放线杆菌1—12个血清型由本实验室分离,保存.细菌培养用LB液体培养基
7、.1.2试剂OMP分离所用的N一十二烷酰肌氨酸(N—Lauroylsarcosine)和N一2一羟乙基哌嗪一N一2一乙磺酸(HEPES)分别为Sigma公司和上海伯奥生物科技有限公司(进口分装)产品;SDS—PAGE所用丙烯酰胺,三羟甲基氨基甲烷(Tfis)分别购自上海伯奥生物科技有限公司(进口分装)和北京夏斯生物有限公司;甲叉双丙烯酰胺,过硫酸氨和十二烷基磺酸钠(SDS)均购自北京鼎国生物技术发展中心(Sigma分装).SDS—PAGE考马斯亮蓝染色法除
