ghrelin对重症急性胰腺炎大鼠胃肠运动的影响

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1、Ghrelin对重症急性胰腺炎大鼠胃肠运动的影响【摘要】目的观察Ghrelin对重症急性胰腺炎大鼠胃肠运动的影响，同时探讨其机制。方法ethodsulticlamp700B膜片钳放大器和Digdatal1322A模-数/数-模转换器，日本Nikon公司TS100倒置显微镜，美国ALAScientificInstruments公司DADVC-8PP型8通道灌流系统。1.3.2主要溶液［1］台氏液（mmol/L）：NaCl147，KCl4，CaCl22，NaH2PO40.42，Na2HPO42，MgCl21.05，葡

2、萄糖5.5，以NaOH调pH7.4。PSS（mmol/L）：NaCl134.8，KCl4.5，HEPES10，MgCl21，葡萄糖10，CaCl22，以Tris调pH7.4。电极内液（mmol/L）：天冬氨酸110，Mg-ATP5，HEPES5，MgCl21，KCl20，EGTA0.1，di-tris-creatinephosphate2.5，di-sodium-creatinephosphate2.5，以KOH调pH7.3。1.3.3单个胃窦环形平滑肌细胞的分离选取对照组和模型组大鼠各10只，模型制备方法同上，

3、造模后12h处死动物显露全胃。剪取角切迹右侧至幽门的部分（胃窦部），放入氧饱和的台氏液中，剪开胃窦部，剪除黏膜层后即可暴露出环行肌层，沿环行肌走行方向用剪刀剪取1mm×5mm的环行肌条。用含1％Ⅱ型胶原酶、1％胰蛋白酶抑制剂、2％牛血清白蛋白的消化液于37℃水浴振荡消化15min，然后置于4℃冰箱中备用，实验前用吸管反复吹打后，取上清液可得单个胃窦环形平滑肌细胞。1.3.4钙敏感性钾电流IK（Ca）的记录取各组大鼠分离细胞悬液接种于灌流槽中，细胞贴壁后PSS灌流以清除悬浮的细胞碎片。形成吉欧封接后，高电压脉冲击破

4、细胞膜形成全细胞记录模式，进行参数补偿后开始实验参数记录。将细胞膜电位钳制在-60mV，以每10s给予20mV的阶跃刺激使细胞膜电位从-60mV去极化至100mV，时间持续400ms，分别观察PSS和含10nmol/LGhrelin的PSS灌流下IK（Ca）的数值变化。1.4统计学方法采用膜片钳数据软件Clampit9.2和统计软件SPSS13.0进行数据分析，在每一细胞上所取得原始电流值进行归一化处理，除以对照组中的最大电流值得出其相对值。实验结果均以（x±s）表示，多个样本均数间比较用单因素方差分析（oneV

5、时，模型组IK（Ca）的平均幅度为（2.03±0.20）nA，对照组为（1.63±0.17）nA，电流增加差异具有显著性（P<0.01）；在含10nmol/LGhrelin的PSS灌流下，模型组大鼠与PSS灌流时相比，IK（Ca）明显降低，当细胞膜电位去极化至+60mV时，模型组IK（Ca）的平均幅度为（1.83±0.13）nA，与PSS灌流下相比，电流降低差异具有显著性（P=0.01），见表2，图1。表2细胞膜电位去极化至+60mV时IK（Ca）的变化注：与对照组比较，#P<0.01；与PSS灌流比

6、较，*P<0.053讨论急性胰腺炎早期，胰酶的活化，炎性介质、细胞因子和氧自由基的诱生引发的机体超强的炎症反应是造成早期病理损害的主要原因，但随后的肠源性细菌移位导致的严重感染和内毒素血症造成了后期病理生理的恶性循环，对机体产生第二次打击，引发严重的多脏器衰竭。目前研究认为，SAP时促进细菌移位的机制主要包括：（1）SAP时胃肠运动功能的改变，如胃肠动力减弱，肠腔积液积气，肠管扩张等，为肠道内细菌的滞留和过度繁殖创造了条件，引起以革兰阴性菌为主的肠道需氧菌过度增殖，而双歧杆菌和乳酸杆菌明显减少，破坏了肠道微

7、生物的平衡［2～4］；（2）肠道黏膜屏障的通透性增加。SAP时，肠道作为机体应激的中心器官之一，早期即可出现肠道屏障功能损伤，其机制复杂，可能与多方面因素有关［5～6］；（3）宿主免疫功能下降。这些因素相互协同作用，促进细菌向肠腔外其他部位移位。本实验中模型组大鼠肠转运系数明显低于对照组（P<0.05），证实了SAP下大鼠的胃肠运动减弱，是促进肠源性细菌移位，进而导致严重感染和内毒素血症的一个重要因素；通过促进胃肠蠕动排泄毒素，可以达到调整肠道微生态平衡，减少内毒素吸收的作用。Ghrelin是生长激素促分泌

8、剂（GHSs）受体的内源性配体，在胃、小肠的神经和肌肉组织中均有其受体的表达，Ghrelin可以通过胆碱能神经元刺激消化间期胃及小肠的运动［7］，有实验显示大鼠静脉注射Ghrelin后，胃排空和小肠对流质饮食的传送加快，并可逆转手术后肠梗阻［8］。此外Ghrelin作为一个胃肠激素，与胃动素（motilin）的分子结构相似，在胃肠道表现出和胃动素类似的促进胃排空作用，可能