egcg对胃癌细胞mgc803+reck基因表达的影响及其调控机制研究

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1、分类号密级UDC编号UNIVERSITYOFSOUTHCHINA硕士学位论文EGCG对胃癌细胞MGC803RECK基因表达的影响及其调控机制研宄研究生姓名:导师姓名、职称:学科、专业名称:研宂方向:毛振江李国庆副教授内科学胃癌的防治2010年3月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研宄所作

2、的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：年月日关于学位论文使用授权说明本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文;学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。作者签名：导师签名：日期：年月曰主要英文缩写4中文摘要57弓I胃9实验材料12实验方法15实验结果22i寸i仑27gi仑28参考文献33综迷37研究成果及发表文章42致i射43主要英文缩写缩写词全称中文名称bp

3、basepair碱基对cDNAcomplementaryDNA互补DNAdNTPdeoxynucldeosidetriphosphate脱氧三磷酸核苷酸DNAdeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸DTTdithiothreitol二硫苏糖醇ECLenhancedchemiluminescence增强化学发光EDTAethylenediamietetraaceticacid乙二胺四乙酸ECMextracellullamatrix细胞外基质EGCGepigallocatechin.3-gallate表

4、没食子儿茶素没食子酸酯FBSfatalbovineserun胎牛血清HRPhorseradishperoxidase辣根过氧化物酶KD/kDakilodalton千道尔顿MMPMatrixmetalloproteinases基质金属蛋白酶MSPmethylation-specificPCR甲基化特异性PCRmRNAmessengerRNA信使RNANF-kBnuclearfactorkappaB核因子kappaBNP-40nonidetP-40润湿剂P-40ODopticaldensity光密度PBSphoso

5、phatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PCRpolymerasechainreaction聚合酶链反应PDTCpyrrolidinedithiocarbamate二硫代氨基甲酸毗咯烷PMSFphenylmethylsulfonylfluoride苯甲基磺酰氟化物Rnaseribonuclease核糖核酸酶rpmrevolutionsperminute每分钟转数RT-PCRreversetranscriptionpolymerasechain逆转录聚合酶链反应reactionSDSsodiumdode

6、cylsulphate十二烷基磺酸钠SDS-PAGESDS-poIyacrylamidegelelectrophoresisSDS•聚両稀酰胺凝胶电泳TBSTris-bufferedsalineTris缓冲盐溶液TBSTTween-20/Tris-bufferedsaline吐温20/Tris缓冲盐溶液TEMEDtetramethylethylenediamine四甲基乙二胺TrisTris-(hydroxymethyl)aminomethane三羟甲基氨基甲烷TBETris-Borate-EDTATris•硼

7、酸盐-EDTA缓冲液TX-100tritonX-100曲拉通X-114EGCG对胃癌细胞MGC803RECK基因表达的影响及其调控机制研究研究生：毛振江导师：李国庆副教授中文摘要目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸酷(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)对胃癌细胞系MGC803细胞RECK基因甲基化及其mRNA表达水平的影响，并探讨核因子kB(NF-kB)在EGCG诱导RECKmRNA表达中的作用，从而为胃癌的治疗提供理论依据。方法：用EGCG与培养的MGC803细胞作用相应的时间，孵育

8、结朿后，提取细胞DNA，采用甲基化特异性聚合酶链式反应(Methylation-specificPCR，MSP)法检测RECK启动子区域的甲基化及非甲基化情况；同时采用逆转泶PCR(RT-PCR)检测MGC803细胞内RECKmRNA水平；提取细胞总蛋白和核蛋白，Westernblot检测p65的核转位情况；为进一步探讨NF-kB与RECK基因表达的关系，MGC803细胞与25(iMN