丁酸钠诱导txnip表达的调控机制研究及其对a549细胞迁移的影响

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文论文题目：工酸勉透昱!型!里麦鲨趁迥控扭生9婴塞区基过△§垒窆细胞适整的彪喧答辩委员会主席：赵越塾拯(逝江太堂2答辩委员会成员：昱金匝盟左旦(遏趔医型太堂2昱建民副婴壅旦!遏州医型太堂2万方数据温州医科大学硕士学位论文目录缩略词表．．．．．．．．⋯．⋯．．．．．⋯．．．⋯⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．1中文摘要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2ABSTRACT．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41．前言．．

2、．⋯．．．．．．．⋯．．．．．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。。62。精精与方法．．．．．．．．，．．．。．．⋯．．。．．．．⋯．．，．．．．．．．．．．．．．．92．1实验材料和仪器设备．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．92．2主要培养基和试剂配方．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．112．3实验设计和方法⋯．．．．．⋯．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．123．结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．232．1重组质粒构建．．．．．．．．．．．．．．．

3、．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．232．2NAB诱导细胞死亡．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．232．3NAB上调TXNIP的表达．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．252．4NAB通过转录因子NF-Y激活TXNIP转录．．．．．．．．．．．．．．．．．262．5TXNIP在A549细胞内的定位不受NAB处理的影响．．．．．．．．．272．6TXNIPKNOCKDOWN对A549细胞细胞迁移的影响⋯⋯⋯。⋯294．分析讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

4、．．．．．．．．．315．小结．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33致谢．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34参考文献．．．．．．．．．．．．．．⋯⋯．⋯⋯．．．⋯。⋯⋯⋯。⋯。35综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39参考文献．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45学位论文独创性声明．．．．．．．．．⋯．．．．．⋯．．．

5、．．⋯．．．．．．．．．．52II万方数据温州医科大学硕士学位论文缩略词表木按首字母排序万方数据温州医科大学硕士学位论文丁酸钠诱导TXNIP表达的调控机制研究及其对A549细胞迁移的影响中文摘要目的：丁酸钠(Sodiumbutyrate，NaB)是一种组蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制剂，具有广泛的生理功能包括调节细胞分化、增殖和肿瘤抑制功能。硫氧还蛋白相互作用蛋白fthioredoxin．interactingprotein，TXNIP)结合并负调控硫氧还蛋白(TRx)活性进而调节细胞内的氧还水平，同时作为一个转录负调控因子，TXNIP与HDACs结合并调控多个下游基因

6、的表达，参与细胞生长及代谢等重要功能。最近研究表明TXNIP在肿瘤生长和转移中发挥着重要作用。因此本课题以非小细胞肺癌细胞系A549为细胞模型，探索丁酸钠处理后TXNIP表达、细胞内定位变化及T列口对A549细胞迁移的影响。方法：流式细胞仪分析以及DAPI染色分析NaB对A549细胞的影响。基因表达芯片(Affermtry)分析NaB处理前后其基因表达差异，发现丁酸钠处理A549细胞后TXNIP表达上调，进一步qPCR和Westernblot分别验证基因表达芯片结果，双荧光素酶系统检测NaB对TXNIP启动子活性的影响。过表达带有绿色荧光标签的TXNIP质粒，并用荧光显微

7、镜观察TXNIP在细胞中的定位。构建A549细胞TXNIPknockdown稳定细胞系，迁移实验检测TXNIPknockdown之后对细胞迁移的影响。结果：(1)NaB处理诱导A549细胞死亡；(2)NaB上调TXNIP表达；(3)NaB通过核转录因子NF．YC(CCAAT)激活TXNIP转录；(4)NaB不会改变全长或截短的TXNIP细胞内定位；(5)TXNIPknockdown对A549细胞迁移没有影响，在NaB处理下TXNIPknockdown后促进A549细胞迁移。万方数据温州医科大学硕士学位论文结论：NaB通过核转录