mir-4686对a549细胞球增殖的调控作用及其机制研究

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1、miR-4686对A549细胞球增殖的调控作用及其机制研究胡欣春1，2，3，魏益平1，彭金华1，喻东亮1，徐建军1[基金项目]国家自然科学基金重大项目（2011YQ170067）；国家自然科学基金（81160293）；江西省教育厅青年科学基金（GJJ10067）[通信作者]徐建军，E-mail:17344296@qq.com[优先出版]http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1095.R.20131121.1734.019.html（2013-11-21）(330006南昌，南昌大学第二附属医院心胸外科1；3300

2、06南昌，南昌大学医学院2；330006南昌，江西省胸科医院胸外科3)[摘要]目的研究miR-4686对A549细胞球增殖的调控作用及其相关机制。方法培养A549细胞，从中分选出CD133+CD44+A549细胞并置于无血清培养基中培养，形成细胞球后进行CD133+CD44+表达检测。Westernblot检测A549细胞和A549细胞球中Wnt5a、Wnt2蛋白的表达；合成miR-4686抑制物和阴性对照，分别转染A549细胞球48h后，应用Real-timePCR检测转染前后miR-4686的表达变化后，使用Real-timePCR和Wes

3、ternblot分析Wnt5a、Wnt2以及β-cateninmRNA和蛋白的表达变化，利用MTT检测12h、24h、48h细胞的增殖能力。结果流式细胞术检测A549细胞球CD133+CD44+表达为69.800%；A549细胞球分别转染miR-4686抑制物和阴性对照物后，miR-4686的表达以及Wnt5a、Wnt2和β-cateninmRNA和蛋白的表达较对照组和miR-4686阴性对照物组显著下调(P<0.05）；A549细胞球转染miRNA-4686抑制物后12、24、48h，其OD值显著低于对照组和miR-4686对照物干预组（P<

4、0.05）。结论miR-4686介导Wnt信号通路发挥调控A549细胞球增殖的作用，其可成为治疗肺癌的潜在靶点。[关键词]microRNA;抑制物；CD133；肺癌[中图法分类号][文献标志码]AThemechanismandeffectofmiR-4686onproliferationinA549spheresHuXinchun1，2，3,WeiYiping1,PengJinhua1,YuDongliang1,XuJianjun1*(1DepartmentofCardiothoracicSurgery,theSecondAffiliatedH

5、ospitalofNanchangUniversity,Nanchang,Jiangxi,China330006;2MedicineSchoolofNanchangUniversity,Nanchang,Jiangxi,China330006;3DepartmentofChestSurgery,JiangxiChestHospital,Nanchang,Jiangxi,China330006)[Abstract]ObjectiveTostudythemechanismofmiR-4686regulatingtheproliferationofA

6、549spheres.MethodCD133+CD44+A549cellsweresortedbyFACS,andthenculturedinserum-freemedium.PositiverateofCD133+CD44+A549spheresweredetectedbyFACS.Wnt5aandWnt2proteinexpressionofA549cellsandA549sphereswereassayedbyWesternblot.MiR-4686inhibitorsandnegativecontrolweresynthesized.A

7、549spheresweretreatedwithmiR-4686inhibitorsandnegativecontrolseparatelyfor48h,andthentheexpressionofmiR-4686weredetectedbyreal-timePCR.Wnt5a,Wnt2andβ-cateninmRNAandproteinexpressionwasassayedbyRT-PCRandWesternblot,respectively.TheproliferationofA549sphereswasdetectedbyMTTat1

8、2h,24hand48htimepoints.ResultCD133+CD44+A549cellsweresorted.Thepositiverate