石斛组织培养与繁殖

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1、石斛组织培养与繁殖【】本实验以铁皮石斛的茎段作为外殖体，诱导出丛生芽，进行壮苗生根，从而实现大量繁殖培育。外植体在MS+6BA0.5mg/L-2mg/L+NAA0.25mg/L～0.4mg/L或2,4-D0.25mg/L培养基中可以诱导分化丛生芽4倍左右。原球茎分化丛生芽约10～15倍。经过壮苗后在1/2MS+NAA0.2mg/L～0.5mg/L进行诱导生根，生根率大于90%。　　【关键词】铁皮石斛;培养;生根　　　　0.引言　　石斛(Dendrobium)为多年生附生性草本植物，常附生于密林树干或岩石上，并常与苔藓植物伴生，是我国最常用传统药材与中成药的原料药。本实验选取铁皮石斛茎段进行组织

2、培养，提出了一套快速繁殖程序。利用组织培养技术，对药用铁皮石斛进行快速繁殖，是目前解决生产种苗问题的有效方法。　　1.材料及方法　　1.1实验材料　　铁皮石斛为采自山区野生原种。2009年移栽至室内。　　1.2试验方法　　1.2.1外植体的选取及预处理　　取2009年的新生枝条作为外植体。剪取新生枝条长约3cm，修剪枝叶，清洗附带泥土，然后用洗洁精沾海绵轻轻擦洗枝条外表，再用自来水冲洗干净。在无菌条件下用70%酒精浸泡数秒，之后浸泡在0.1%Hgcl溶液消毒处理10min，取出后用无菌水冲洗干净备用。　　1.2.2接种在培养基中　　保持无菌条件，去掉处理好的枝条顶芽，茎段保留1cm长。并且每一

3、小段必须保存有一茎节(芽)，处理完后接种在不同激素浓度的培养基中。其中诱导分化培养基包括以下几种(1)MS+6BA0.5～1.0mg/L+NAA0.25mg/L;(2)MS+6BA0.5～1.0mg/L+2,4-D0.2mg/L;(3)MS+6BA2mg/L+NAA0.4mg/L。诱导生根培养基:1/2MS+NAA0.2～0.5mg/L。　　1.2.3组织培养室的条件　　接种后在全光照条件下培养，每天光照时间保持在10h，光照强度为1200LX温度20±2℃。　　1.2.4诱导生根　　枝条经过继代培养，小苗长到约2cm高时，基部会生出不定根，这时可把生根切割移栽，没有生根诱导生根，具体做法是枝

4、条经修剪后接种到1/2MS+NAA0.2～0.5mg/L培养基中，生根苗28d左右即可移栽到混合基质(珍珠岩、树皮、泥碳等)中炼苗。　　2.结果与分析　　2.1不同基础培养基对铁皮石斛生长的影响　　对于试管移栽苗来说，苗长势的好坏、强壮与否，直接关系到移苗的存活率。因此，设计了MS，1/2MS，KC，1/2KC四种基础培养基考查铁皮石斛壮苗生长的影响。　　2.2不同添加物对铁皮石斛壮苗生根的影响　　设置不同处理诱导生根培养基，用MS加NAA2mg/L，pH为5.6。将大小达3～4cm的无根苗切割成单苗，接种于5种不同处理生根培养基上，每种培养基接种20株，培养28d。　　后统计结果。　　2.3

5、不同激素浓度对外植体的诱导　　外植体分别放在(1)(2)两个激素浓度不同的培养基里面，培养大约一个月，茎段切口地方仅稍微胀大，没有出现愈伤组织，当腋芽生长到1cm的时候，其茎杆柔嫩，叶子呈椭圆状，多生长在顶部。当嫩芽长到1cm多时，将其切下，并依次在(1)、(2)、(3)三个培养基里进行培养。约一个月后，幼苗长至约3cm高，并在基部有约4条长约1cm地不定根出现。将基部产生的原球茎切下，在(2)、(3)培养基里继代培养至其长出10多个不定芽。等到新芽可以区分株型以后，将其按4个一丛移至(1)培养基里壮苗培养。　　2.4试管苗的生根诱导　　铁皮石斛繁殖苗在培养过程中通常会生出不定根，约75%的苗

6、基部都有生长。在转继生根时可把生根的完整植株直接移出瓶栽培，没有生根的修剪之后转继在生根培养基中进行诱导生根，约20d生根率就可完全，不定根约3cm，3～5条，根尖为三角白色。若延长培养生根的时间，小苗的基部以上的茎节也会生出不定根，一般根会向上生长，增加移栽的困难，试管苗基部仍会生发出一些小不定芽。　　2.5试管苗移栽　　当试管苗在生根培养基中生长到约3cm高，有3～5条不定根时，此时要移出培养室，在自然条件下开瓶炼苗4d，然后取出小苗洗净琼脂，阴干上面的水份，然后移栽到的基质盆内。定植后要浇足水，避免阳光直射，早晚进行喷水，空气湿度保持在80%。小苗在约10d后根尖开始露白伸长，叶片变成深

7、绿色。此时茎不会增粗只是质地变硬，茎尖伸长一些。　　3.讨论　　3.1幼苗用MS培养基比用KC培养基培养生长好，其结果见表1。香蕉提取液能促进根系生长,从而使苗的生长加快。为促进幼苗生长，培养基中需添加较高浓度的香蕉提取液。而以MS的培养基为最好，A级比率占84%。　　表1不同培养基对试管苗生长的影响　　3.2不同添加物对铁皮石斛壮苗生根的影响结果见表2，由表2中可以看出：在壮苗生根培养基中，相对