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1、铁皮石斛的组织培养与快速繁殖摘要：实验以铁皮石斛优良品种的茎段为外殖体，诱导丛生芽，壮苗生根，从而实现大量繁殖。当NAA的浓度为0.3mg/L,6-BA的浓度为5mg/L时，铁皮石斛丛生芽的增殖率最高。在MS培养基中，铁皮石斛壮苗生根的最好培养基为MS+6-BA(2mg/L)+20%香蕉汁。不同激素浓度的6-BA对铁皮石斛壮苗生根的影响比较得出，不加6・BA的培养基小苗生根率低、发根迟、根数少;而加人6-BA后以大幅度提高生根率,尤以在6-BA0.4mg/L的培养基中小苗生根快，根数多。从不同培养基对铁皮石斛试管苗生长的影响看出，幼苗用MS培养基比用KC培养基培养生长好。铁皮石斛培养60
2、d左右吋生长速度最快。香蕉提取液能促进生长，从而使苗的生长加快。以MS+香蕉汁20%的培养基为最好。关键词：铁皮石斛；组织培养；丛生芽；壮苗生根铁皮石斛是兰科著名的盆载观花植物，具有很高的观赏价值。近年來,铁皮石斛培养及快速繁殖技术的研究，取得了很大的成果。本实验対药用铁皮石斛茎段进行组织培养，提出了…套快速繁殖程序，为快速育苗提供了有价值的技术资料和科学依据。利用组织培养技术，对药用铁皮石斛进行快速繁殖，是目前解决生产种苗问题的有效方法。1材料与方法1.1试验材料铁皮石斛优良品种，來源于日本。1.2试验方法1.2.1外植体的选取和预处理将从日本引进的生长旺盛的铁皮石斛健康植株，以茎芽为
3、屮心剪下，芽的上下各留0.5cm的茎段，用洗衣粉浸泡20min左右，取出后再用自来水反复冲洗数次，备用。1.2.2外植体的灭菌将预处理过的外植体用75%的酒精溶液灭菌30s,然后用无菌水冲洗I次，将茎段腋芽的苞叶拨去，然后将0.1%的日实12溶液倒人烧杯中灭菌10min，灭菌过程中不断摇动烧杯使灭菌更加彻底，最后用无菌水冲洗5、6次将HgCI2溶液冲净并接种到培养基上。1.2.3培养基的灭菌将三角瓶用玻璃纸包好，作好标记。待琼脂冷凝后放入高压灭菌锅中灭菌（121°C、15min）。冷却后可放人培养室预培养3d,没冇杂菌污染则可取铁皮石斛材料进行接种。1.2.4组织培养室的条件所冇材料均在
4、组织培养室中培养，温度为22°C,每天光照12h,光照强度为2000lxo2结果与分析2.1不同基础培养基对铁皮石斛生长的影响对试管移栽苗來说，苗长势的好坏、壮、弱，直接影响到移苗的成活率。为此，本实验设计了MS,1/2MS,KC,1/2KC基础培养基对铁皮石斛壮苗生长的影响，其结果见表2。从表2中可以看出：幼苗用MS培养基比用KC培养基培养生长好。香蕉提取液能促进根系生长，从而使苗的生长加快。为促进幼苗生长，培养基中需添加较高浓度的香蕉提取液。而以MS的培养基为最好，A级比率占84%2.2不同添加物对铁皮石斛壮苗生根的影响为了探寻铁皮石斛无根苗生根壮苗的合适培养基，设置以下不同处理（表
5、2）诱导生根培养基，用MS加NAA2mg/L/PH为5.6。将大小达3-4cm的无根苗切割成单苗，接种于5种不同处理生根培养基上，每种培养基接种20株，培养28d后统计结果。从表2中可以看出：在壮苗生根培养基中，在对照（处理5）中，既添加2mg/L的NAA可以使25%无根苗长出根；在添加了香蕉之后（处理I）效果明显，生根率达到95%,而且每株苗平均冇4.5条根，且组培苗健壮，根系粗壮，表明香蕉汁对铁皮石斛生根壮苗有显著促进作用。2.3铁皮石斛生长的最佳时间将带有一个芽的铁皮石斛茎段接种于已经确定的最适基础培养基（MS+香蕉汁20%）上，在温度为22°C，每天光照12h，光照强度为2000
6、h的条件下培养，分别于30d、45d、60d和80d统计诱导产生的丛生芽数。由表3可以看出当培养30d是已经冇明显的变化芽增殖数为15。随着培养时间的增长芽的增殖数不断增加。10d左右带有一个芽的铁皮石斛茎段开始有明显的变化。随着时间的增长逐渐有新的小芽长出，有的长成膨大芽。30d时芽增殖数已经达15个。当生长到60d时达到铁皮石斛的最高生长点。以后铁皮石斛的生长趋于平缓的生长。2.4激素对铁皮石斛丛生芽增殖的影响2.4.1NAA浓度对铁皮石料从生芽增殖的影响将6・BA的浓度定为5mg/L,向培养基（每种培养基中均加人20%的香蕉汁）中加入0.2,03,0.4（mg/L）浓度的NAA，将
7、带有一个芽的铁皮石斛茎段接种于培养基上，每个梯度的外殖体数定为20,在温度为22°C,每天光照12h,光照强度为ZOOOh的条件下，培养60d,统计从生芽，进行梯度的筛选。由表4可以看出在6-BA浓度为5mg/L及添加物不变的情况下，当NAA的浓度为0.3mg/L吋平均增长的芽数最多为5.4。由此可见当NAA的浓度为0.3mg/Lz6-BA浓度为5mg/L时，铁皮石斛从生芽的增殖率最高。2.4.26-BA浓度对铁皮石斛丛生芽增殖的影
