【精品】铁皮石斛组织培养.doc

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1、铁皮石斛组织培养研究进展组织培养摘要：近年来，对铁皮石斛的需求日趋增加，而野生资源难以满足市场需求，组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况，并展望了发展前景。铁皮石斛为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。《神农本草经》列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植

2、物，被列为国家重点保护的野生药材品种。为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。1种子萌发1.1胚龄不同种龄的种子萌发率不一样。叶秀嶙等取铁皮石斛2~6个月种龄的种子进行组织培养发现，种龄愈长，萌发率愈高。2个月种龄的种子接入改良N6培养基中，萌发率仅为6%;3个月种龄的种子接入改良叹培养基中，培养2周后开始萌发，萌发率为87%;4一6个月种龄的种子接入培养基中，只要培养一周即可萌发，萌发率为95%。曾宋君等将铁皮石斛种子接入改良N6培养基中进行组织培养，亦得到相似的结论，幼胚胚龄在60d以下时，萌发率极低，

3、随着胚龄的增长，其萌发期逐渐缩短，萌发率逐渐升高，成苗率也逐渐升高，但到达一定的胚龄后，差异并不明显。1.2基本培养基铁皮石斛种子在N6,改良N6,MS,1/2MS,SH、KS、VW、KundsonC,1/2N6,White等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、MS等14种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其屮以N6最好，SH、Kn、MS次之，1/2MS、1/2Vw最差。曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH、改良N6、MS、KS、VW、KundsonC培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT培

4、养基。罗吉凤等比较了MS、1/2MS、1/2N6和White培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d种子发芽率均达到95%,但1/2MS培养基上所萌发的原球茎较大。1.3激素在培养基屮添加一定浓度的NAA可促进种子的萌发，浓度以0.2—0・5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。2,4-D对胚的萌发起抑制作用。6-BA对胚萌发后的生长起抑制作用。KT、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过lmg/L时，对胚萌发和成苗起抑制作用。ABA有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0

5、.5mg/L为最佳。1.4天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。1.5炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2%蔗糖。曾宋君等在改良N6+NAA0.2mg/L的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖屮含有适合胚萌发和成苗的矿质元素2原球茎增殖2.1基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以1/2MS,MS等作为基

6、本培养基。张治国等研究了6种不同培养基对铁皮石斛原球茎增殖的影响，结果表明，1/2MS是原球茎增殖的适宜培养基。2.2激素适宜的NAA、KT、6—BA浓度对原球茎的增殖起促进作用。唐桂香等以1/2MS为基本培养基，发现BAl.Omg/L和NAAO.lmg/L有利于原球茎诱导增殖。蒋林等叫研究表明，l/2Ms+NAA1.0mg/L+KTO.2mg/L比较适合嗓球茎的增殖。蒋波等以1/2MS为基本培养基•添加BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L或6—BA3.0mg/L+NAAO.5mg/L的激素，原球茎的增殖系数较大。陈兆贵等认为原球茎

7、增殖以MS+NAA1.0mg/L+6—BA1.0mg/L+KT1.0mg/L为最佳，35d增殖倍数达到5倍。2.3天然添加物椰子汁、苹果汁对原球茎的增殖有较好的效果，但香蕉汁对原球茎的增殖有抑制作用。张治国等认为原球茎增殖时最好不添加任何天然提取物。2.4炭源添加活性炭能使原球茎的壇殖量显著增加，这可能是活性炭吸附了某种不利于原球茎增殖的物质，蔗糖浓度0.5%-0.3%。周根余等比较了不同炭源对铁皮石斛原球茎生长的影响，发现原球茎在蔗糖中生长最快，浓度3%,葡萄糖中其次，而乳糖中最慢。3原球茎分化3.1基本培养基铁皮石斛原球茎分化可以1

8、/2MS,MS等作为基本培养基。张治国等比较了VW、N6、1/2MS、B5、KC等6种基本培养基对原球茎分化的影响，发现6种基本培养基附加马铃薯提取液和植物激素后，原球茎均可分化，但以1/2MS培养基作为原