铁皮石斛组织培养报告.doc

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1、关于铁皮石斛组织培养与栽培技术的报告1培养基1・1配方根据不同阶段，培养基配方有所差异。如表1表1各种培养基配方不同阶段培养基备注愈伤组织（原球茎）的诱导MS+2.0mg/L6-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8原球茎的增殖MS+20%马铃薯+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8原球茎的分化MS+20%马铃薯+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.8幼株的生根壮苗MS+10%香蕉+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂pH=5.4-5.61.2配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例）10%香蕉（w/w）+MS+3%蔗糖（w/

2、w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/LNAA1）量取800ml蒸馆水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；2）准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min,其间搅拌使之充分溶解；3）按照大量、微量、F0盐、有机I、有机II顺序，量取MS各种母液于盛有50ml蒸懾水的烧杯，混合均匀；4）将2）和3）的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2mlNAA（0」mg/ml）,混合均匀；5）加热至沸腾，加入琼脂并煮沸5mim其间不断搅拌使之充分溶解；6）冷却至50±5°C时，调pll至5.4—5.6。分装于培养瓶内，33.3ml/瓶。注意事项

3、%1溶解香蕉的蒸馆水尽可能多，以确保香蕉各种成分完全溶解；%1各种母液混合时，要按照大量、微量、盐、有机I、有机II的顺序；%1煮沸时，小心溶液溢出；%1分装时不要污染培养瓶瓶口。1・3灭菌1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生；2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝；3）打开电源和排气阀，调节电压至220V；4）待排气阀排除水蒸气30s—lmin后，关闭排气阀；5）当温度上升到121°C后，调节电压至135V,保持20min；6）关闭电源，使之自动降温至0°CO10m

4、in后，打开排气阀和锅盖；7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。表2灭菌时间统计~单锅灭菌（耗时多锅连续灭菌卩丿I段64min）第一锅（耗时63min）第二锅（耗时46min）起始排气22:2122:418:048:239:309:43T=121°C22:508:329:50关闭电源23:108:5210:10气压降至023:259:0710:16注意事项%1启动灭菌前，应检查水位、电源、排气阀、安全阀、排气管等，确保正常；%1灭菌锅底部应铺垫一层报纸，以防培养瓶机械破损；%1灭菌电圧不宜超过220V,否则灭菌锅会剧烈摇晃，造成不必要的损

5、害和安全隐患；%1当温度达到121°C后，调节电压至135V,并且时不时注意温度的变化，确保温度介于121-122°C之间;%1气压降至0后，不宜立即揭盖；最好在5-10min后揭盖，这样才能缓和内外“气压和温度差”;%1揭盖5-10min后，再转移锅内培养基，以免烫伤。%1每锅只能灭菌18瓶2转接2.1转接前准备1）培养皿、银子、剪刀等转接用具的灭菌（可以在培养基灭菌时附带）；2）检查超净台内各种用具，及时补充酒精灯的酒精，确保用具齐全；3）放置待转接材料和待接入培养基，以“方便操作为宜”而陈列；2.2转接1）揭去防尘膜，打开电源、通风和紫外灯，灭菌15

6、-20min；2）关掉紫外，打开白炽灯，用75%洒精仔细擦拭手指、指甲、材料瓶瓶盖及盖边缘、工作区等处，确保“消毒”彻底；3）点燃酒精灯，用无菌锻子把材料夹取于无菌培养皿内，挑选生命力旺盛的植株用于转接；4）用无菌剪刀修去多余的根系，“双疑子”法将材料转接于新的培养基中；5）标注相关日期和品系，转至培养室培养。注意事项%1操作时，所有用具均不能从“核心工作区”和开启的培养瓶上面晃过，防止细菌落入而导致污染；%1在打开材料瓶和培养瓶后，其盖均在酒精灯外焰灼烧3-5s,瓶口灼烧5-10s；盖瓶盖时，亦如此操作；%1转接时，确保手一直在超净台内，以免带入外界细菌

7、。2.3培养培养条件：白炽灯12h/黑暗12h+20°C3炼苗3.1目的炼苗的主要目的是使组培苗适应外界的环境一一温差，湿度差以及微生物环境。3.2炼苗方法1）将待炼苗的材料放置于欲移栽的环境，不开盖保持4・5天；2）半开盖保持1・2天后，全开盖再炼苗2・3天；方法（整个过程：适应期，半开瓶期，开瓶期，出瓶，洗根，浸泡，移栽或框炼并移栽）移栽：基质选择，移栽方式基质选择1栽培的基质为火山岩1+椰衣2+木炭1的基质配比石斛兰长势最好，椰衣1+水苔1和块状椰衣的基质配比稍微次之。多数树皮中含有较多的酚类物质，这对于植物是有害的，而且树皮的C/N比值都较高，直接

8、使用会引起微生物对速效氮的竞争作用，造成N素缺乏，树皮保水性能差（