高效液相色谱法测定乐山栀子熊果酸含量

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1、高效液相色谱法测定乐山栀子熊果酸含量蒲清荣，唐灿，张彦燕，李云鹏，赵剑，刘智权【摘要】　　目的为控制乐山栀子的质量，建立高效液相色谱法测定乐山栀子中熊果酸含量的方法。方法采用高效液相色谱法，以熊果酸为化学对照品，固定相：UltimateTMC18键合硅胶柱(4.6mm×250mm,5μm)，流动相：甲醇∶水∶冰醋酸∶三乙胺（90∶10∶0.03∶0.06），流速0.6ml·min-1，温度25℃，波长210nm测定乐山栀子熊果酸含量。结果熊果酸在0.1～3.0μg范围内峰面积A与其质量M呈现良好的线性关系，其回归方程为：A＝－12954.8

2、829＋452850.9603M，r＝0.9996，n＝7；3批乐山栀子中熊果酸的含量分别为（0.2555±0.0016）mg·g-1药材，RSD＝0.6221%，n＝4；（0.265825±0.003491）mg·g-1药材，RSD＝1.313%，n＝4；（0.258875±0.006198）mg·g-1药材，RSD＝2.394%，n＝4；精密度实验RSD＝1.754%，仪器精密度良好；稳定性实验RSD＝3.493%,在3.5h测定熊果酸的含量是稳定的；重现性实验RSD＝0.9051%，平均回收率101.9%。结论高效液相色谱法适合乐山栀

3、子中熊果酸的含量测定，该方法操作简便，结果稳定，精密度、重现性、回收率较好，值得推广。【关键词】乐山栀子；熊果酸；含量测定；高效液相色谱法　　Abstract：ObjectiveToestablishthemethodofdeterminingthecotentofursolicacidinFructusGardeniaebyHPLC.MethodsHPLCinethecontentofUrsolicacidinFructusGardeniceursolicacidasthestandard,Solidphase:UltimateTMC18

4、(4.6mm×250mm，5μm),Liquidphase∶Methyiaicohol∶C18键合硅胶柱(4.6mm×250mm,5μm)；AS3120AUltrasonicCleaner；AP-01P真空泵；HaierBCD-176DA电冰箱；SHHV21型长风三用电热恒温水浴箱；ZK072型电热真空干燥箱；RE-52B型旋转蒸发器；AS701KDTUltrasonicCleaner；UV-9200型紫外可见光分光光度计；FA1104C18键合硅胶柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相为甲醇∶水∶冰醋酸∶三乙胺（90∶10∶0.03

5、∶0.06）；流速0.6ml·min-1；温度25℃；波长210nm〔7〕。　　2.2栀子熊果酸提取条件优选以药材粒径、甲醇加入量、超声提取时间、超声提取次数4因素3水平，以熊果酸收率为指标，选用L9（34）正交表优选栀子熊果酸提取条件为：栀子药材粉碎为50目粉末，加入甲醇量为药材量的5倍，每次超声提取60min，超声提取3次，可使熊果酸收得率达到最大，且经济合理，将另文报道。　　2.3熊果酸标准曲线绘制〔8〕精密称取熊果酸化学对照品2.0mg（60℃减压干燥24h），用无水甲醇定容于10ml容量瓶中，即得0.2mg·ml-1的熊果酸对照品

6、溶液。熊果酸在0.1～3.0μg范围内峰面积A与其质量M呈现良好的线性关系，其回归方程为：A＝－12954.8829＋452850.9603M，r＝0.9996，n＝7。　　2.4精密度实验精密吸取上述熊果酸对照品溶液10μl，其积分面积RSD＝1.754%，n＝5，表明该方法、该仪器测定熊果酸精密度符合要求。　　2.5稳定性实验精密吸取上述熊果酸对照品溶液10μl，每隔30min测定1次，其积分面积RSD＝3.493%，n＝5。表明熊果酸用该方法在该仪器上3.5h内测定结果较稳定，符合要求。　　2.6栀子熊果酸含量测定重现性实验照前面“2

7、.2”项栀子熊果酸的提取工艺，测得栀子熊果酸含量RSD＝0.9051%，表明该方法重现性实验符合要求。　　2.7栀子熊果酸加样回收率实验照前面“2.2”项栀子熊果酸的提取工艺提取，取该溶液2ml，加入上述熊果酸对照品溶液0.3ml，平均加样回收率为101.9%，表明该方法测定栀子熊果酸的加样回收率符合要求。　　2.83批乐山栀子熊果酸含量测定按照“2.2”项的提取条件提取3批乐山栀子熊果酸，按照上述测定条件分别测定熊果酸含量，测定结果见表1〔9〕。　　3讨论经过采集乐山、云南、贵州、湖南、河南等地的栀子并测定熊果酸含量，发现乐山栀子含量最高

8、，证实其确为质量优良的正宗川栀子。　　实验发现，上述熊果酸对照品溶液积分面积为1.5×105～2.5×105，峰高为6×103～7×103，理论塔板数约1.2×104时，峰高法计