高效液相色谱法测定广西产美味狝猴桃根中熊果酸的含量

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1、高效液相色谱法测定广西产美味狝猴桃根中熊果酸的含量梁洁甄汉深李生茂马雯芳刘振杰张婷【摘要】　　目的测定广西产美味狝猴桃根中熊果酸的含量。方法以熊果酸含量为考查指标，采用正交实验优选提取工艺。采用高效液相色谱法，色谱柱为ThermoHypersilBDSC18色谱柱(5μm,4.6mm×250mm)；柱温20℃；流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液（85∶15）；流速1.0ml/min；检测波长210nm。结果熊果酸的浓度在0.0125～0.1500mg/ml时与峰面积呈良好的线性关系，样品的平均回收率为99.

2、35％，RSD为1.52％（n＝6）。结论该方法准确可靠，重复性好，适用于美味狝猴桃根药材的质量控制。【关键词】高效液相色谱广西产美味狝猴桃根熊果酸　　Abstract:ObjectiveTodeterminetheursolicacidintherootsofActinidiadeliciosainGuangxiprovincebyHPLC.Methodsentsizeextractiontechnology.HPLCmethodedonHypersilBDSC18column(5μm,4.6mm×25

3、0mm).Thecolumntemperatureobilephaseconsistedofacetonitrile-0.1%phosphoricacid(85∶15).Theflol/min.Thedetection.ResultsTheresultshog/ml.Theaveragerecoveryethodisconvenient,sensitiveandreliable.ItcanbeusedforqualitycontrolofActinidiadeliciosa.　　Keyplicity-18

4、5超纯水仪（美国密里博公司）；BP211D电子天平分析天平（德国赛多利斯）。　　1.2药材与试剂美味狝猴桃根采于广西桂林（雁山植物园）及桂林地区（资源县、兴安县、全州县、龙胜县），经中国科学院广西植物研究所植物分类室鉴定为狝猴桃科狝猴桃属植物美味狝猴桃ActinidiadeliciosaC.F.LiangetA.R.Ferguson。标本存于广西中医学院药物分析教研室。熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号200212，供含量测定用），甲醇为色谱纯（天津市四友精细化学品有限公司），乙腈为色谱纯（天

5、津市四友生物医学技术有限公司），水为超纯水，其它所用试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为ThermoHypersilBDSC18色谱柱(5μm,4.6mm×250mm)；柱温为20℃；流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液（85∶15）；流速为1.0ml/min；检测波长为210nm；进样量为10μl；理论塔板数（以熊果酸计算）不低于6000。　　2.2熊果酸提取方法的考察　　2.2.1提取溶剂的考察分别比较了20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇和无水乙醇对美味狝猴桃根熊果酸的提

6、取效果。精密称取美味狝猴桃根粗粉（过24目筛）5份，每份约1.0g，置具塞锥形瓶中，分别加入上述不同的溶剂各20ml，称定重量，超声处理40min，放冷，称定重量，分别加入上述不同的溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，进行含量测定。结果20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇和无水乙醇提取熊果酸的含量分别为0.259，0.358，0.851，1.486，0.983mg/g。实验结果表明80％乙醇提取熊果酸的提取率最高。　　2.2.2提取方法的考察比较了水浴回流提取、超声提取和冷浸3种提取方法对

7、美味狝猴桃根熊果酸的提取效果，精密称取美味狝猴桃根粗粉（过24目筛）3份，每份约1.0g，分别加入70％乙醇20ml，采用以上3种提取方法分别提取1h，取续滤液，进行含量测定。结果回流提取、超声提取和冷浸提取熊果酸的含量分别为0.953，1.278，0.294mg/g。结果表明超声提取对熊果酸的提取率最高。　　2.2.3正交实验采用正交实验法优化提取方法，考察了提取溶剂（A）、溶剂用量（B）、提取时间（C）和提取次数（D）对提取结果的影响，各因素取3水平，进行L9（34）正交实验，正交设计表及分析结果见表

8、1～3。　　表1正交实验因素水平（略）　　表2正交实验L9（34）结果（略）　　表3方差分析（略）　　由实验结果的直观分析及方差分析可知，影响熊果酸提取效果的因素大小顺序为A＞C＞B＞D，即提取溶剂＞提取时间＞溶剂用量＞提取次数，而且各影响因素对实验结果有显著性影响。直观分析确定最佳提取方法为A2B3C3D2：即以25倍量的80％乙醇超声提取2次，40min/次。　　2.3熊果酸的含量测定　　2.3.1对照品溶液的制备精密称取