糖尿病大鼠肠道、胰腺glp1受体mrna的表达

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1、糖尿病大鼠肠道、胰腺GLP1受体mRNA的表达【摘要】目的：研究胰高血糖素样多肽1(GLP1)受体mRNA表达水平在大鼠肠道不同部位和胰腺分布的特点及两者间的差异.方法：以RNA表达水平.结果：GLP1受体mRNA表达中，正常大鼠不同肠段以空肠表达量最低，与回肠和结肠相比较差异有统计学意义(P<0.05)，回肠与结肠相比较差异无统计学意义(P>0.05).糖尿病组大鼠空肠GLP1受体mRNA相对表达量为0.27，而对照组大鼠空肠的相对表达量为0.59；糖尿病组大鼠结肠GLP1受体mRNA相对表达量为0.5，对照组大鼠结肠的相对表达量为1；糖尿病组大鼠

2、胰腺GLP1受体mRNA相对表达量为0.37，而对照组大鼠胰腺的相对表达量为0.97，两组间空肠、结肠和胰腺GLP1受体mRNA相对表达量差异均有统计学意义(P<0.05).糖尿病组回肠GLP1受体mRNA相对表达量为0.73，对照组回肠的相对表达量为0.86,两组间差异无统计学意义(P>0.05).结论:糖尿病大鼠GLP1受体mRNA相对表达量在空肠、结肠和胰腺的下调，提示空肠、结肠和胰腺GLP1受体的表达变化可能与GK大鼠的糖尿病发生发展有关.【关键词】受体胰高血糖素GK大鼠实时定量PCR　　0引言　　胰高血糖素样多肽1(glucagonlike

3、peptide1，GLP1)是体内的肠肽激素,其在调节体内葡萄糖稳态中起重要作用［1］.GLP1受体广泛分布于胰腺、肺、脑、下丘脑、心血管系统、肾脏和胃肠道等.目前对GLP1受体的研究多集中在胰腺、神经和心血管系统［1-2］，而GLP1受体在遗传性2型糖尿病GK（Gotokakizaki）大鼠与正常大鼠肠道系统不同部位表达程度的比较还鲜见报道.本研究采用实时定量PCR方法检测GLP1受体mRNA在大鼠不同肠段的分布特点并比较遗传性2型糖尿病GK大鼠与正常大鼠的空肠、回肠、结肠和胰腺GLP1受体的表达变化，探讨大鼠肠道和胰腺GLP1受体在糖尿病时的改变.　

4、　1材料和方法　　1.1材料遗传性2型糖尿病GK大鼠4只,雄性，25～30er510合成,由上海生物工程公司合成.　　1.2方法　　1.2.1实验分组遗传性2型糖尿病GK大鼠，空腹血糖高于9mmol/L或口服葡萄糖耐量实验2h血糖高于13.9mmol/L为已发病的GK大鼠，4只作为实验组；同种系同in.使用强生稳步血糖仪测定尾静脉血糖值，并自大鼠尾静脉取血约250μL，4℃，3000g,离心10min取血清约100μL，置-80℃冰箱保存，待测定胰岛素.　　1.2.3实时定量PCR组织取材大鼠在OGTT实验后，20g/L戊巴比妥钠腹腔麻醉下(0.5mL/kg),打开腹腔留

5、取所需空肠、回肠、结肠和胰腺各约100mg置冻存管中，立即放入液氮中冷却后置-80℃冰箱保存，用于实时定量PCR检测.　　1.2.4组织总RNA提取及反转录成cDNA将约100mg所需组织液氮中研磨后，置1mL预冷的总RNA提取试剂中,快速彻底匀浆，室温放置5min；12000g离心10min，取上清移入另一新管；加200mL氯仿,剧烈震荡15s,室温放置5min，4℃12000g离心15min，取出上层无色的液体层移入另一新管；加入等体积异丙醇，室温放置10min，4℃12000g离心10min，弃上清；加入1mL750mL/L乙醇混匀，4℃7500g离心5min,弃上

6、清,真空干燥沉淀的RNA；用无RNA酶水50μL溶解沉淀物，取1μL总RNA稀释100倍，用紫外分光光度计测定吸光度，A260nm/A280nm比值大于1.9，RNA浓度=（A260nm-A320nm）×稀释倍数×0.04μg/μL，取20～50μgRNA,用DNA处理酶处理后，再次抽提RNA；用紫外分光光度计测定吸光度A值,A260nm/A280nm比值大于1.9，取500ngRNA将其反转录为cDNA.反转录条件：37℃15min,85℃5s.　　1.2.5实时定量PCR反应PCR反应体系为：模板cDNA1μL，2×SYBRPremixExTaq12.5μL,上下游引

7、物各1μL，加水至25μL，每个样品重复3管.所用引物设计如下:GLP1受体(68bp):上游:5＇CATCCACCTGAACCTGTTTGC3＇,下游:5＇GGGCAGCGTCTTTGATGAAG3＇；GAPDH(176bp)上游:5＇GGATGCAGGGATGATGTTC3＇,下游:5＇TGCACCACCAACTGCTTA3＇.实时PCR反应在BioradIQ5System中95℃10s，95℃5s，62℃30s，共45次循环.PCR产物从60℃缓慢而均匀地升温至95℃，温度每升高0.2℃计算机收集一次荧