胚胎来源的猪多能性干细胞系建立及其多能性改善研究

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1、Ｕ录目录麵Ｉｌｌ艘Ｉ１前言１１．１１多能干细胞概述１．１．１多能干细胞的定义和分类１－．２细胞在其它物种研究进展２１．】胚胎Ｔ．３１２猪胚胎干细胞的研究价值和应用前景１．２．１概述３１．２．２建系影响因素４１．３多能干细胞调控通路５１．３．１多能干细胞状态分级５３２７１．．多能干细胞依赖的信号通路１．３．３猪多能千细胞多能性和信号通路特殊性９１．４猪多能干细胞鉴定标准及现状１０］．５成分明确的无血清培养基１１．１６本研宄的目的和意义１１２材料与

2、方法１３２．１实验材料１３２．１．１１３实验动物和材料．．２主要仪器和设备３２１１．２．１３主要试剂和试剂盒１４２．．４１常用试剂和配制１５２．２１６实验方法２．２．１猪体外受精胚胎获得１６２．２．２细胞培奍１７２．２．３慢病毒包装１８２．２．４多性鉴定１９２．２．５多能干细胞基因编辑２１２．２．６猪体细胞核移植和重构胚发育统计２２２．２．７嵌合体制备２２２．２．８嵌合体验证２２２．２．９统计分析２２３结果与分析２４３．１从体外受精胚胎中分离培养获得

3、猪多能干细胞系２４３．１．１氧气浓度对猪多能千细胞建系效率的影响２４Ｉ东北农业大学理学博士学位论文３．１．２细胞培养液对猪多能千细胞建系效率的影响２４３．１．３胚龄对猪多能干细胞建系效率的影响２５３１２６．．４从猪体外受精胚胎中分离培养获得猪多能干细胞系３ＰＰＳＳ２６．２Ｃ特性鉴定３＿２＿１ＰＳＣｓ性鉴定２６ｐ特３．２．２ｐＰＳＣｓ依赖的信号通路２９３．２．３ＰＳＣｓ拟胚体形成及自发分化２９ｐ３．２．４ｐＰＳＣｓ畸胎瘤形成能力３０３ｐＰＳｓ．３Ｃ潜在应用价值３１３．

4、３．１ＰＳＣ３ｐｓ基因编辑操作及多能性验证１３－．３．２ＰＳＣＦＤｓ用作核移植供体细胞３２ｐ－３．３．３ＣＦＤｓ嵌合体制备及嵌合能力验证ｐＰＳ３３３．４无血清条件下培养获得猪多能干细胞系３５３．４．１无血清培养基的筛选３５３．４．２无血清培养基中基础培养液对猪多能干细胞建系效率的影响３６３４ＰＳＣ－ＫＯ．．３无血清条件下分离培养获得猪多能干细胞系（ｐｓ）３７３ＰＳＣ－ＫＯ．５ｐｓ特性鉴定３８－３ＰＳＣＫＯｓ分化能力和发育能力３９．６ｐ３．６．１拟胚体形成和自发分化３９３．６．２４

5、１神经诱导分化和成骨诱导分化３．６．３转基因操作及用于体细胞核移植操作４１３．６．４嵌合能力验证４３４讨论４４４１．猪多能干细胞系的建立４４４２４４．猪多能干细胞所依赖信号通路的特异性４．３猪多能干细胞的转基因操作和应用４５４．４猪多能干细胞的嵌合能力４５４．５培养环境决定细胞特性４６５４４蘭４４５１附录６０攻读博士学位期间发表的学术论文６４ＩＩＣＯＮＴＥＮＴＳＣＯＮＴＥＮＴＳＡｂｓｔｒａｃｔｉｎＣｈｉｎｅｓｅＩＡｂｓｔｒａｃＩｌｌｔ

6、ｉｎＥｎｇｌｉｓｈ１Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ１１．１Ｓｕｍｍａｒｏｆｌｕｒｉｏｔｅｎｔｓｔｅｍｃｅｌｌｓ１ｙｐｐ１．１．Ｔｈｉｉｔｉｏｎｌａｉｆｉｃａｔｉｏｏｆｌｉｏｔｅｎｔｓｔｅｍｃｅｌｌｓ１１ｅｄｅｆｎａｎｄｃｓｓｎｐｕｒｐ１．１．２Ｅｍｂｒｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｏｔｈｅｒｓｅｃｉｅｓ２ｙｐ１．２Ｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｖａｌｕｅａｎｄａｌｉｃａｔｉｏｎｒｏｓｅｃｔｏｆｏｒｃｉｎｅｅｍｂｒｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ３ｐｐｐｐｐｙ．

7、２．３１１Ｓｕｍｍａｒｙ１．２．２Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｆａｃｔｏｒ４１．３Ｔｈｅｒｅｕｌａｔｉｏｎａｔｈｗａｓｏｆｌｕｒｉｏｔｅｎｔｓｔｅｍｃｅｌｌｓ５ｇｐｙｐｐ．３．ｈｅｌｉｔｅｔｌｌ７１１Ｔｓｔａｔｅｏｆｕｒｏｎｔｓｅｍｃｅｓｐｐｉｉ１．３．２Ｔｈｅｓｇｎａｌｌｎｇａｔｈｗａ９ｐｙ１．３．３Ｔｈｅａｒｔｉｃｕｌａｒｏｆｌｒｉｏｅｎｃａｎｄｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａｓｉｎｉｓ１０ｐｉｔｙｐｕｐｔｙｇｌｇｐｙｐｇｈｌａｉｉ０１．４Ｔｅａｒａｉｓａｓｔａ

8、ｎｄａｒｄｎｄｔｈｅｒｅｓｅｎｔｓｔｕａｔｏｎ１ｐｐｐ－ｉ１．５Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｄｅｆｉｎｅｄ