xist tale r-dtfs来源的小鼠ips细胞系的建立及多能性鉴定

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1、XistTaleR-dTFs来源的小鼠iPS细胞系的建立及多能性鉴定拟胚体(EB)分化和实时定量PCR(PolymeraseChainReaction)技术对获得的XistR-dTFs来源iPS细胞系进行鉴定，并比较由R4和R6诱导获得的iPS细胞系的嵌合体发育能力。实验结果：1、在获得的9只小鼠胎儿中，除4撑丢失GOF．GFP外，其余8只均为GOF．GFP阳性，此外，2≠}、3撑、6jfi}和8jfi}为雄性，其余为雌性。2、由XistTaleR-dTF+4F(Oct4，Sox2，c．Myc和Klf4)诱

2、导成功获得了R4、R6和ConR三种iPS细胞系。建立的iPS细胞克隆形态显示为典型的干细胞克隆形态，并可传50代以上。3、XistTaleR-dTF来源的iPS细胞碱性磷酸酶染色呈强阳性；实时定量PCR显示在由XistTaleR-dTF+4F诱导获得的iPS细胞中Oct4、Sox2、Nanog、Rexl等多能性基因的表达水平与干细胞相近；将iPS细胞注入小鼠皮下成功形成了畸胎瘤并且分化形成了三胚层组织；于体外悬滴培养iPS细胞成功形成了拟胚体，免疫荧光染色结果显示来源于三胚层的经典标记AFP、T和NCAM

3、l均为阳性；将雌性小鼠iPS细胞进行囊胚注射，最终成功获得到了嵌合体小鼠，嵌合体的获得效率如下：ConR为1／8，R4为1／6，R6为1／5。综上所述，XistR-dTFs来源的iPS细胞具有与ES类似的多能性，并且囊胚注射所使用的R4、R6和ConR三种雌性小鼠iPS细胞系均具有形成嵌合体小鼠的能力。关键词：Xist；小鼠iPS；多能性鉴定；嵌合体II万方数据内蒙古大学硕士毕业论文ESTABLISHMENTANDCHARACTERIZAT10N0FMOUSElPSCELLLINESDERIVEDFROMX

4、ISTTALER-DTFSABSTRACT'TheXchromosomeinactivationandreactivationarepresentedinbothprocessesofearlymammalianembryonicdevelopmentandcellulardifferentiation／reprogramminginvitro．AsakeyfactorforinactivatingXchromosome(xco，Xistgene，alongnon-codingRNA(LncRNA)，med

5、iatesmultipleRNA-priteincompoundscollectionviacis—bindingXchromosomeandeventuallyinitiatesXCI．Thepreviousstudyhadusedtranscriptional—activator-likeeffectorsbaseddesignertranscriptionfactors(Tale-dTFs)tofindouthowXistcontributedintheprocessofcellularreprogr

6、amming，andtheyfoundbothXistTaleR-dTFR4andR6couldpromotetheformationofinducedpouripotentstemcells(iPSC)，andR6playedmoreobviouspartthanR4．However,thepluripotencyofiPScellsderivedfromXistR-dTFshasnotreportedyet，especiallythecapacityofchimericmice．Ourstudyrepr

7、ogrammedGOF-GFPMEFsintoiPScellsusingCO．transfectionwithYamanakafactors(Oct4，Sox2，c-Myc和Klf4)andXistTaleR-dTEThepluripotencyofthosederivediPScellswerecharacterizedbyalkalinephosphatasestaining，Immunofluorescencestaining，real-timequantitativePCR(RT-qPCR)，ter

8、atomaformationandembryoidbody(EB)differentiation．Inadditional，thecapacityof万方数据XistTaIeR-dTFs来源的小鼠iPS细胞系的建立及多能性鉴定chimericmousegenerationfromthederivediPScelllineswasaccessed．Theresultshowedbelow：1．4≠}sample，o