建立21味寒水石散中没食子酸的含量测定方法

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1、建立21味寒水石散中没食子酸的含量测定方法【关键词】21味寒水石散；,,没食子酸；,,含量测定；,,高效液相色谱法　　摘要：目的建立21味寒水石散中没食子酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法测定21味寒水石散中没食子酸的含量，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇水（5∶95）为流动相，检测波长为274nm。结果线性范围0.0206～0.2472μg，平均回收率为99.1%，RSD=1.3%(n=9)。结论该方法简便、准确，提供了21味寒水石散中没食子酸的质量控制方法。　　关键词：21味寒水石散；没食子酸；含量测定；

2、高效液相色谱法　　21味寒水石散为一藏药，藏药名为“木布玉杰日布”。主要有寒水石（奶制）、诃子、余甘子、藏木香、木香、木瓜等21味药材组成，具有制酸，止痛之功效。主要用于培根木布引起的呕吐酸水，胃部刺痛，大便干燥等症〔1〕。没食子酸又称五倍子酸，在藏药材诃子、毛诃子、余甘子等中含量丰富，其在21味寒水石散中的含量测定未见报道。没食子酸含量测定方法有光谱法〔2〕、比色法〔3〕、薄层色谱(TLC)〔4〕和HPLC法〔5〕等，本文采用高效液相色谱(HPLC)法，制定出该制剂中没食子酸的含量测定方法。　　1仪器与试药　　1.1仪器Agil

3、ent1100型高效液相色谱仪，DAD检测器，Agilent1100色谱工作站；KromasilC18（250mm×4.6mm，5μm，大连依利特科学仪器有限公司）色谱柱；KQ3200超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；TG328A电光分析天平（上海天平仪器厂）。　　1.2试药甲醇（色谱纯）；没食子酸对照品（由中国科学院西北高原生物研究所胡凤祖副研究员提供，经归一化检测，含量大于99％）；21味寒水石散（青海藏医院）。　　2方法与结果　　2.1对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成20.6μg/ml的对照品溶液

4、。　　2.2供试品溶液的制备精密称取样品2.0g，精密加入甲醇100ml，称定重量，超声提取1h，放冷，用甲醇补足减失的重量，过滤，弃去初滤液，续滤液过0.45μm滤膜，即得供试品溶液。　　2.3空白样品溶液的制备将处方中含没食子酸的药材如诃子、余甘子等去除后，按供试品溶液的制备方法制备。　　2.4色谱条件色谱柱：KromasilC18柱；流动相：甲醇水（5∶95）；流速：1.0ml/min；检测波长：274nm；柱温：30℃；进样量：5μl。在此条件下，没食子酸与其它峰分离效果较好，样品与对照品在同一保留时间有相同的波峰出现，而

5、空白溶液则无相应的峰，证明空白样品不干扰，含量测定专属。结果见图1~3。　　2.5线性关系实验精密吸取对照品溶液1，3，6，10，12，15，18μl进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，没食子酸进样量（μg）为横坐标，回归方程为：Y＝9219X+6.051，相关系数r＝0.9997。结果表明，没食子酸在0.0206～0.2472μg之间呈良好的线性。[NextPage]　　2.6精密度实验取对照品溶液5μl，重复进样6次，根据测得的峰面积积分值计算，RSD为1.0％。　　图1对照品HPLC色谱图(1.没食子酸)(略)　　图2样品HP

6、LC色谱图(1.没食子酸)(略)　　2.7重复性实验精密称取样品2.0g，共6份，按2.2所述方法处理，按上述色谱条件进样测定，结果重现性良好，样品中没食子酸含量的RSD为1.9％。　　2.8稳定性实验按2.2所述方法处理样品1份，按上述色谱条件测定，间隔2h/次，结果12h内稳定性良好。　　图3空白样品HPLC色谱图(略)　　2.9回收率实验取样品约2.0g（n=9），精密称定，加入一定量的没食子酸对照品。按2.2所述方法处理并依法测定，计算回收率结果。见表1。　　表1回收率实验结果(略)　　2.10样品测定取3批成药样品，按2

7、.2所述方法制备成供试品溶液，按上述色谱条件进行分析，按外标法以峰面积积分值计算，求得样品中没食子酸的含量（每批样品测3次取平均值）分别为0.074％、0.073％和0.073％。　　3讨论　　3.1检测波长确定对没食子酸对照品溶液在200～400nm范围内进行扫描，测得其在220nm和274nm有最大吸收，比较相同条件下样品于220nm和274nm波长下的色谱图，检测波长为274nm的色谱图，分离效果好，且杂质干扰少，因此，采用274nm为检测波长。　　3.2提取方法确定比较了不同提取方法对提取率的影响，考虑提取时间和方法的简便

8、性，采用超声1h提取。　　3.3流动相选择以甲醇水系统为流动相进样色谱分析，经试验研究表明，甲醇水比例为5∶95时，样品峰不拖尾，分离较好。　　3.4本法测定藏药21味寒水石散中没食子酸的含量，分离度好，具有简便、快速、重现性好等优点。可作为21味