高效液相色谱测定七味红花殊胜丸中没食子酸的含量

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1、高效液相色谱测定七味红花殊胜丸中没食子酸的含量【摘要】目的建立测定七味红花殊胜丸中没食子酸含量的方法。方法采用kromasil-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱；流动相为甲醇∶水(含0.04%磷酸)=5∶95；检测波长为274cm；流速1ml·min-1；柱温35℃。结果没食子酸在0.0103～0.206μg之间呈良好的线性关系。平均回收率为100.32%，RSD=1.88%（n=6），r=0.9998。结论该法简便，灵敏度高，重现性好，可作为该制剂的质量控制方法。【关键词】高效相液相色谱七味红花殊胜丸没食子酸七味红花殊胜丸是常用藏药，为黄褐色水丸，气

2、微香，味苦。主要成分为红花、天竺黄、獐牙菜、诃子、麻黄、木香、马兜铃、五脉绿绒蒿。功能清热消炎，保肝退黄,用于新旧肝病、劳伤引起的肝血增盛、肝肿大、巩膜黄染和食欲不振〔1〕。其中含有大量的没食子酸。没食子酸含量测定方法有薄层扫描法〔2，3〕，高效液相色谱法〔4，5〕。为有效控制其质量，本文采用高效液相色谱法对七味红花殊胜丸中没食子酸的的含量进行了测定，收到满意的效果。方法简便可靠，分离度好，结果稳定，为控制该产品质量提供了可靠的依据。　　1仪器与材料　　Agilent1100高效液相色谱仪，配置：手动进样器，在线脱气机，高效二元梯度泵，恒温柱温箱，DAD检测器，Ag

3、ilent1100色谱工作站。没食子酸对照品为中国药品生物制品检定所提供；试剂：甲醇为色谱纯，水为三重蒸馏水，磷酸等均为分析纯。　　七味红花殊胜丸样品及阴性对照品由青海晶珠藏药集团公司提供。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱采用kromasilC18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇∶水（含磷酸0.04%）=5∶95，流速为1ml/min，检测波长为274nm，进样量：10μl；柱温35℃。对照品和样品色谱图见图1。　　a-供试品b-对照品c-阴性实验1.没食子酸　　图1HPLC图谱（略）　　2.2对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥至恒重的

4、没食子酸对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.1mg的溶液，即为对照品溶液。　　2.3供试品溶液的制备将七味红花殊胜丸粉碎，称量约2.0g，精密称定。加入甲醇15ml，超声提取30min，抽滤，以甲醇洗涤滤渣两次，1ml/次。滤渣重复上述操作，所得滤液与前一次滤液合并，浓缩后定容至50ml。过0.45μm滤膜后,即为供试品溶液。　　2.4阴性溶液的制备按处方配比称取除去诃子药材的其它药材，制备阴性实验样品，然后按供试品溶液的方法提取，并按上述色谱条件测定。结果在没食子酸出峰位置未见其它杂质峰的干扰峰（见图1）。说明按本文的实验条件测定，缺样空白无干扰。　　2.5线性关系

5、的考察精密量取对照品溶液，用甲醇稀释，配制成一定浓度的对照品标准液系列溶液，每次进样10μl，测定色谱峰面积的积分值，以峰面积积分值A为纵坐标，以进样量X（μg）为横坐标，测得没食子酸的回归方程为:A=10929X-31.526，相关系数r=0.9998。结果表明没食子酸在0.0103～0.206μg之间线性关系良好。　　2.6精密度实验取同一对照品溶液10μl注入液相色谱仪，重复进样6次,根据测得峰面积峰值计算，RSD为2.53%。　　2.7重复性实验按供试品溶液制备方法处理同一批样品6份，按上述色谱条件进行次测定，结果重复性良好，样品中没食子酸含量的RSD为1.

6、37%。　　2.8稳定性实验按供试品溶液制备方法处理样品1份，按上述色谱条件测定6次，每次间隔约4h。结果20h内稳定性良好，样品中没食子酸含量的RSD为2.55%。　　2.9回收率实验准确称取已测知含量的同一批样品，定量加入没食子酸对照品适量，按供试品溶液制备方法处理并依法进行测定，结果测定的平均回收率为103.08%，RSD为1.88%(n=6)。　　表1加样回收实验结果（略）　　2.10样品的测定精密称取样品2.0g，按“2.3”项下方制备供试品溶液,经微孔滤膜(0.45μm)过滤,取续滤液10μl进样，进行测定，样品中没食子酸含量为2.73mg·g-1，保留

7、时间为9.80min。RSD为1.37%(n=6)。　　3讨论　　对没食子酸对照品溶液在200～400nm范围内进行扫描，测得其在215nm和274nm有最大吸收，比较相同色谱条件下样品与215nm和274nm波长下的色谱图，检测波长为274nm的色谱图没食子酸峰可以与其它峰达到良好的基线分离，并且杂质干扰少，因此采用274nm为检测波长。　　样品中含有可水解的鞣质,加热提取会水解成没食子酸，因此，样品选用超声提取的方法，操作简便，结果准确。【