建立21味寒水石散中没食子酸的含量测定方法

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1、建立21味寒水石散中没食子酸的含量测定方法　　关键词：21味寒水石散；没食子酸；含量测定；高效液相色谱法　　21味寒水石散为一藏药，藏药名为“木布玉杰日布”。主要有寒水石（奶制）、诃子、余甘子、藏木香、木香、木瓜等21味药材组成，具有制酸，止痛之功效。主要用于培根木布引起的呕吐酸水，胃部刺痛，大便干燥等症［1］。没食子酸又称五倍子酸，在藏药材诃子、毛诃子、余甘子等中含量丰富，其在21味寒水石散中的含量测定未见报道。没食子酸含量测定方法有光谱法［2］、比色法［3］、薄层色谱(TLC)［4］和HPL

2、C法［5］等，本文采用高效液相色谱(HPLC)法，制定出该制剂中没食子酸的含量测定方法。　　1仪器与试药　　1.1仪器Agilent1100型高效液相色谱仪，DAD检测器，Agilent1100色谱工作站；KromasilC18（250mm×4.6mm，5μm，大连依利特科学仪器有限公司）色谱柱；KQ3200超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；TG328A电光分析天平（上海天平仪器厂）。　　1.2试药甲醇（色谱纯）；没食子酸对照品（由中国科学院西北高原生物研究所胡凤祖副研究员提供，经归一化检

3、测，含量大于99％）；21味寒水石散（青海藏医院）。　　2方法与结果　　2.1对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成20.6μg/ml的对照品溶液。　　2.2供试品溶液的制备精密称取样品2.0g，精密加入甲醇100ml，称定重量，超声提取1h，放冷，用甲醇补足减失的重量，过滤，弃去初滤液，续滤液过0.45μm滤膜，即得供试品溶液。　　2.3空白样品溶液的制备将处方中含没食子酸的药材如诃子、余甘子等去除后，按供试品溶液的制备方法制备。　　2.4色谱条件色谱柱：KromasilC18

4、柱；流动相：甲醇水（5∶95）；流速：1.0ml/min；检测波长：274nm；柱温：30℃；进样量：5μl。在此条件下，没食子酸与其它峰分离效果较好，样品与对照品在同一保留时间有相同的波峰出现，而空白溶液则无相应的峰，证明空白样品不干扰，含量测定专属。结果见图1~3。　　2.5线性关系实验精密吸取对照品溶液1，3，6，10，12，15，18μl进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，没食子酸进样量（μg）为横坐标，回归方程为：Y＝9219X+6.051，相关系数r＝0.9997。结果表明，没食子酸在

5、0.0206～0.2472μg之间呈良好的线性。[NextPage]　　2.6精密度实验取对照品溶液5μl，重复进样6次，根据测得的峰面积积分值计算，RSD为1.0％。　　图1对照品HPLC色谱图(1.没食子酸)(略)　　图2样品HPLC色谱图(1.没食子酸)(略)　　2.7重复性实验精密称取样品2.0g，共6份，按2.2所述方法处理，按上述色谱条件进样测定，结果重现性良好，样品中没食子酸含量的RSD为1.9％。　　2.8稳定性实验按2.2所述方法处理样品1份，按上述色谱条件测定，间隔2h/次，

6、结果12h内稳定性良好。　　图3空白样品HPLC色谱图(略)　　2.9回收率实验取样品约2.0g（n=9），精密称定，加入一定量的没食子酸对照品。按2.2所述方法处理并依法测定，计算回收率结果。见表1。　　表1回收率实验结果(略)　　3.2提取方法确定比较了不同提取方法对提取率的影响，考虑提取时间和方法的简便性，采用超声1h提取。　　3.3流动相选择以甲醇水系统为流动相进样色谱分析，经试验研究表明，甲醇水比例为5∶95时，样品峰不拖尾，分离较好。　　3.4本法测定藏药21味寒水石散中没食子酸的含

7、量，分离度好，具有简便、快速、重现性好等优点。可作为21味寒水石散中没食子酸含量测定的常规方法。　　参考文献：　　［1］中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准・藏药，第1册［S］.1995：139.　　［2］沙东旭，徐缓绪.叶下珠化学成分的研究［J］.沈阳药科大学学报，2000，17（3）：176.　　［3］熊皓平，杨伟丽，张友胜，等.显齿蛇葡萄多酚含量测定方法的比较研究［J］.湖南农业大学学报，2001，27（5）：381.　　［4］李爱群，蔡葵花，林励.薄层色谱法测定利

8、喉乐含片中没食子酸的含量［J］.分析测试学报，1999，18（1）：64.　　［5］胡晓伟，宋旭峰.RPHPLC法测定柿蒂中没食子酸的含量［J］.中国药事，2003，17（6）：371.