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1、HPLC法测定五黄膏中没食子酸的含量【摘要】目的建立五黄膏中没食子酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0mL/min;检测波长为270nm。结果没食子酸的线性范围为0.1892～1.892μg(r=0.9999),平均回收率为99.2%,RSD=1.22%。结论本法高效、快速、灵敏,可作为五黄膏质量控制的有效方法。【关键词】五黄膏;没食子酸;高效液相色谱法;含量测定 Abstract：ObjectiveTosetupamethodfor
2、determiningthecontentofgallicacidinWuhuangGao.MethodsHPLCseparationwasperformedbygradientelutingwithmethanol-0.1%phosphoricacidattheflowrateof1.0mL/min.Thedetectionwavelengthwas270nm.ResultsThelinearrangeofgallicacidwas0.1892～1.892μg,r=0.9999.Theavera
3、gerecoveryratewas99.2%,RSD=1.22%.ConclusionThemethodishighlyeffective,quickandsensitive,andsuitableforqualitycontrolofWuhuangOintments. Keywords：WuhuangOintments;gallicacid;HPLC;contentdetermination 五黄膏是由五倍子、黄芩、冰片3味中药组成的复方制剂,具有清热解毒、消肿止痛、化瘀散结、除湿收敛之功效
4、[1],临床上用于治疗麦粒肿及疖、甲沟炎。五倍子为方中主药,没食子酸为其主要有效成分。为有效控制产品质量,笔者建立了五黄膏中没食子酸含量的高效液相色谱(HPLC)测定法。 1仪器与试药 岛津高效液相色谱仪,二元梯度泵,SPD-M20A检测器,SIL-20AC自动进样器,CTO-20A柱温箱,LC-Solution化学工作站。 没食子酸对照品(批号110831-200302,纯度为99.1%)由中国药品生物制品检定所提供;五黄膏(批号060832、060833、060834、060835、06
5、0836、060837)由北京双吉制药有限公司提供。甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件 SHISEIDOCAPCELLPAKC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,按表1中的规定进行梯度洗脱。检测波长为270nm,流速1.0mL/min,进样量10?L。表1梯度洗脱表3 2.2空白试验 按处方中药味比例,配制不含五倍子的群药,按其工艺制成空白制剂(由北京双吉制药有限公司提供),再按供试品溶液的制备方法制
6、备并测定,色谱图见图1。表明阴性样品溶液在与没食子酸对照品相同保留时间处未显色谱峰,故认为无干扰。 2.3对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品适量,加50%甲醇制成每1mL含60?g的溶液,作为对照品溶液。 2.4供试品溶液的制备 取本品0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50mL,密塞,摇匀,称定重量,加热回流1h,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45?m)滤过,取续滤液,作为供试品溶液。 2.5线性关系的考察 精密吸取没食子
7、酸对照品溶液(0.0946mg/mL)2、4、8、12、16、20?L,注入液相色谱仪,记录峰面积。以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归,得标准曲线方程为：A=3.877×106+2.468×103,r=0.9999(n=6)。没食子酸在0.1892～1.892?g 范围内线性关系良好。 2.6精密度试验 精密吸取同一供试品溶液(批号060832)10?L,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定。重复测定6次,没食子酸峰面积RSD=0.25%。 2.7稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液(批
8、号060832)10?L,分别于配制后0、4、8、12、24h测定,测得峰面积RSD=0.27%,表明供试品溶液在24h内基本稳定。 2.8重复性试验 取同一批样品(批号060832)6份,分别按样品测定法测定,求得RSD=0.94%,结果表明方法重复性良好。 2.9加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批样品(批号060832,6.317mg/g)0.25g,分别精密加入没食子酸对照品溶液(0.06072mg/mL)25mL,再精密加入50%甲醇253mL,按上述供试品溶
