论文-李永辉-益智中圆柚酮治疗肾损伤的药效研究

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1、益智中圆柚酮治疗肾损伤的药效学研究李永辉1,2，张俊清1,2（1.海南省热带药用植物研究开发重点实验室，海口，571199；2.海南医学院药学院，海口，571199）【摘要】目的：对圆柚酮治疗慢性肾脏疾病的药效进行评价，阐述益智补肾缩尿的物质基础。方法：采用腺嘌呤诱导的CKD大鼠模型，对益智中圆柚酮的肾损伤保护作用进行研究，分别测定24小时尿量、尿蛋白（UP24h）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、硫酸吲哚醇（IS）的含量以及对肾脏病理切片进行观察，以确定圆柚酮对CKD的治疗作用。结果：与模型组比较，圆柚酮各剂量组大鼠肾组织病理切片形态均有不同

2、程度的改善，其中圆柚酮高剂量组>圆柚酮中剂量组>黄葵胶囊组>圆柚酮低剂量组，且高剂量组大鼠血清中BUN和IS及尿蛋白含量中低剂量组降低更明显；与高剂量组相比，中剂量组血清中Scr降低较明显。结论：圆柚酮对CKD呈现明显的量效关系，高剂量组药效强于低剂量组。【关键词】圆柚酮；慢性肾脏疾病；药效学；病理切片；慢性肾脏疾病(ChronicKidneyDisease,CKD)是一种多种原因诱导肾脏功能下降的疾病，近年来发病率呈现逐年上升的趋势，现已成为影响人类健康的一类常见病和多发病[1-3]。目前，慢性肾病的治疗主要为控制患者症状，降低蛋白尿的形成，在临床

3、上取得了一定的疗效，但仍有较多的患者疗效不佳。肾脏疾病的临床研究发现，中药在改善患者临床症状、控制蛋白尿、减少血尿、保护肾功能和减轻西药的副作用方面呈现了较好的优势[4]。益智性温味辛，归脾肾经，具有温脾，暖肾，固气，涩精的功效。临床上用于治疗冷气腹痛，中寒吐泻，多唾，遗精，小便余沥，夜多小便等证。益智做为传统肾脏用药[5-7]，在临床上广泛用于慢性肾脏疾病的治疗，然而对其药效物质基础及作用机制研究甚少。本课题组在多年益智研究工作的基础上，发现其主要成分圆柚酮对CKD的具有较好的治疗作用。因此，本实验以腺嘌呤诱导的大鼠肾损伤模型，对圆柚酮的药效学进行

4、评价，以期阐明益智补肾缩尿的物质基础及其作用机制，为益智的临床应用提供实验支撑。1材料与方法1.1动物健康SD雄性大鼠48只，体重(180-220g)，SPF级，长沙市天勤生物技术有限公司提供，合格证号SCXK(湘)2009-0012，常规适应性饲养1周，无不良反应者进入实验。1.2药品与试剂圆柚酮由李永辉提供，HPLC含量大于98%，批号：；黄葵胶囊，江苏苏中药业集团生产，批号15052703；尿素氮试剂盒（批号：20150605)及肌酐试剂盒（批号：20150616)，尿蛋白定量试剂（批号：:2150603）均由南京建成生物工程研究所提供；，腺嘌

5、呤（RealJimer，批号641255）。其它试剂购于上海化学试剂公司。1.3仪器GS-15Ｒ型低温离心机，Beckman公司；DW-40L262型低温冰箱，海尔；PL203型电子分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司；e2695液相色谱仪，Waters公司生产。1.4造模取SD大鼠（180-220g），随机分为6组，分别为：正常组、模型组、黄葵胶囊组、圆柚酮高剂量组、圆柚酮中剂量组和圆柚酮低剂量组，模型组和实验组大鼠按150mg/kg灌胃腺嘌呤混悬溶液造模，连续造模14天后，将大鼠置于代谢笼中，分别收集正常组、模型组和实验组的24h尿量，模型组和实验组

6、24h尿量大于正常组为造模成功。正常组给予生理盐水，模型组继续按照150mg/kg腺嘌呤灌胃，实验组同时给予150mg/kg的腺嘌呤溶液和圆柚酮不同浓度的样品溶液。1.5分组及给药模型成功后，将大鼠48只，随机分为6组，即正常组、模型组、阳性药物组、圆柚酮化合物分高、中、低三个剂量组，每组8只。正常组（灌生理盐水），模型组（按150mg/kg﹒d灌腺嘌呤混悬液），黄葵胶囊组（按0.75mg/kg﹒d灌胃给药），圆柚酮高剂量组（按20mg/kg﹒d灌胃给药），圆柚酮中剂量组（按10mg/kg﹒d灌胃给药），圆柚酮低剂量组（按5mg/kg﹒d灌胃给药），

7、各组每日灌胃1次，不限制饮食和水，干预周期为2周，期间不使用抗CKD药物。1.6检测指标1.6.1尿蛋白2周末，分别将各组大鼠置于代谢笼内，禁食不禁水，收集24h尿液，计24h尿量，充分混匀后，于1300r/min离心5min，收集上清液，通过尿蛋白定量试剂测定24h尿蛋白量。1.6.2肾功能大鼠空腹6小时后，乙醚麻醉，腹主动脉取血，分离血清，通过尿素氮试剂盒和肌酐试剂盒分别检测血尿素氮(bloodureanitrogen,BUN)、血清肌酐(serumCreatinine,SCr)。参照文献[8]采用HPLC荧光法测定血浆中硫酸吲哚酚的含量：Phe

8、nomenexLuna色谱柱（4.6×150mm，5μm），流动相为乙腈-水-三氟乙酸(15:85:0.2，