疟原虫的镜检技术课件

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1、疟原虫的RDT检测及镜检技术疟疾的实验室诊断1.病原学诊断：显微镜血涂片检查结果阳性；这种镜检确诊最可靠。2.免疫学诊断：（1）循环抗原的检测（2）循环抗体的检测3.分子生物学技术：PCR和DNA探针已应用与疟疾的诊断。分子生物学、血清学技术发展迅猛，但是确诊疟疾的“金标准”仍然是病原学诊断显微镜检查疟原虫。★快速诊断试纸条可与镜检疟原虫相互补充。疟原虫抗原检测（一）原理快速检测试剂是通过在硝酸纤维素膜（NC）试纸条上产生可见的条带来检测抗原的一种“免疫-层析”试剂。染色标记抗体与疟原虫抗原结合，复合物由试剂条检测线上的抗体捕获后，形

2、成一条可见的条带（检测线）。检测的第一步是将溶血剂与血液混合，破坏血红细胞释放疟原虫蛋白，便于与标记抗体靶蛋白结合；然后将血液与标记抗体的混合液置于硝酸纤维试纸条上，并通过毛细管作用和缓冲液/清洗剂推力，使混合液在试纸条上移动并通过检测线与对照线。OptiMALIT卡疟疾快速诊断试剂盒使用说明书4.将吸血后的毛细管竖立于凹槽2中，捏出全部血液并与凹槽中稀释液混匀约1分钟。血膜的制作（取血时间）采血时间现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。疟疾典型的临床表现分前驱期、发冷（寒战）期

3、、发热期、出汗期和间歇期五期。间日疟在前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低，镜检多为阴性。发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨破红细胞期，镜检多为裂殖体和环状体。发热期，外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见到裂殖体；出汗期因原虫密度太低，镜检多为阴性。发作后数小时（h），间歇期外周血中以大滋养体为主，形态较易辩认，为诊断的有利时机；发作36-48h，可检出裂殖体；发作1-2次后，配子体出现较多。恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20h内取血，初发患者退热后常查不到原虫。末梢血血检到恶性疟原虫配子体，是在末梢血出现环状体之后

4、的10天左右。血膜的制作（取血操作）在采集标本、制作血片前，首先要核对患者的姓名、年龄和住址。采血部位和方法：采血部位一般人为耳垂，指头；一人一针，常规消毒、采血。取血部位和血量采血部位和取血方法：耳垂或无名指（婴幼儿母趾或足跟），通常在耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，右手持消毒针迅速刺入皮肤，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻挤压出血。厚血膜血量约一粒大米（即火柴头）大小。血膜的制作用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘，称厚血

5、膜。无特殊要求的可厚薄血膜分载玻片涂制。发热病人血片标本片血膜的制作（涂片操作）涂制厚、薄血膜的位置通常将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个；门诊和发热病人血片每片1人，涂2个厚血膜1个薄血膜，以防血膜脱落而影响检查；标本片发热病人血片标签薄血膜的制作薄血膜用推片一端边缘的中点从取血部分①取约1～1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，并形成25～350夹角，待血液向

6、两侧扩展约②2cm～2.5cm宽时，均匀而迅速地从右向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。推制时速度要均匀，血滴大小、推片与载玻片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄。制成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之间互相接触而不相互重叠。③薄血膜外观：舌状厚薄均匀，无划痕，④位于玻片1/2～1/3处【左半部分（或第4—6份）】。熟练工作者的推片姿势厚血膜的制作厚血膜用推片的左下角，从取血部位刮取①约4～5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小

7、圆形厚血膜(厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个自细胞为宜)，③厚血膜的位置，位于玻片右1/3处[中央偏右（或6等份中的与贴标签的1、2份相邻的第3份中部）]。④厚血膜外观：圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求，以油镜视野5-10个WBC为宜。标准的疟疾厚薄血膜位置各种不同的疟疾血片涂制法：标准血片（1人）门诊发热病人血片（1人）居民普查血片（2人）血膜的制作血膜编号血膜制成后，立即在玻片面上写上受检者的号码，以防差错；待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号和受检者的个人编号，依次顺序插入标本盒内

8、。染液的种类染液种类：疟原虫的染色，目前临床上应用最广泛的是瑞氏（Wrightstain）和吉氏染液（Giemsastain）。这些染液中的主要染剂都包含美蓝、伊红和由美蓝氧化所成的天青，所以称多色性染剂。