疟原虫的镜检技术-制片染色

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1、疟原虫镜检技术——制片与染色主讲内容厚薄血膜的制作与染色。疟原虫计数方法。血膜的制作（所需设备）载玻片：新玻片浸入有液态洗涤剂的清水中10-20分钟，干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干，最后用干净柔软的棉巾将玻片擦亮。已用过的玻片浸泡于洗涤剂溶液中1-2天，或浸泡于煮沸的5%肥皂水中1-2小时，再放入新配置的洗涤剂溶液中1-2小时，逐个擦去血膜痕迹，清水漂洗干净，擦亮。采血针：一次性玻片盒：防止污染和昆虫吸食血膜75%酒精棉球：采血前后消毒记号笔：玻片上书写号码血膜的制作（取血时间）现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。疟疾典

2、型的临床表现分前驱期、发冷（寒战）期、发热期、出汗期和间歇期五期。间日疟在前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低，镜检多为阴性。发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨破红细胞期，镜检多为裂殖体和环状体。发热期，外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见到裂殖体；出汗期因原虫密度太低，镜检多为阴性。发作后数小时，间歇期外周血中以大滋养体为主，形态较易辩认，为诊断的有利时机；发作36-48h，可检出裂殖体；发作1-2次后，配子体出现较多。恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20h内取血，发作后2小时左右，此时环状体发育至最高峰，初发患者退热后常查不到原虫。末梢血血检到恶性疟原虫配子体，是在末

3、梢血出现环状体之后的7-10天。血膜的制作（取血操作）在采集标本、制作血片前，首先要核对患者的姓名、年龄和住址。取血部位和方法耳垂或无名指（婴幼儿拇趾或足跟），通常在耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，右手持消毒针迅速刺入皮肤，不宜过深或过浅（1～2mm为宜）。然后用左手大拇指、食指和右手中指协同轻轻挤压出血滴。用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂成薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。最好一张玻片上同时制作厚、薄两种血膜。涂制厚、薄血膜的位置作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个。方法是将载片分为6等分，第

4、1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。门诊和发热病人血片每片1人，涂2个厚血膜1个薄血膜，以防血膜脱落而影响检查。标本片发热病人血片标签厚血膜的制作取洁净的载玻片1张，左手持载玻片平置,右手持推片，用推片的一角，从取血部位刮取①约4～5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小圆形厚血膜。位置，位于玻片右1/3处（中央偏右或6等份中的与贴标签的1、2份相邻的第3份中部）。外观，圆形厚薄均匀，边缘整齐。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求，以1个油镜视野5-10个白细胞为

5、宜。薄血膜的制作用推片一端边缘的中点从取血部位①刮取约1～1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片中线接触，并形成25～350夹角，待血液向两侧扩展约②2cm～2.5cm宽时，均匀而迅速地从右向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。注意：推制时速度要均匀，血滴大小、推片与载玻片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄。也可载玻片平置在桌面上操作。位置，位于玻片左半部分或第4格前缘到第6格中部；外观，舌状厚薄均匀，无划痕；应在玻片上形成平铺的红细胞，红细胞之间互相接触而不相互重叠。正确的推片姿势标准的疟疾厚薄血膜位置血膜的编号血膜制成后，立即在玻片面上贴标签或

6、写上受检者的号码，以防差错；待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号和受检者的个人编号，依次顺序插入标本盒内。制作血膜注意事项清洗玻片，且勿碰撞、磨损载玻片必须完全清洁无油渍或污垢。制片时，手指勿接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。刚涂制的血膜要平放在标本盒内厚血膜未干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响检查结果；晾干血膜时应注意防尘，防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜；干后应及时装入标本盒并盖严。血膜应自然干燥切忌在毒太阳下晒或火烤，加快其干燥可采用手背上或衣服摩擦、风

7、吹，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能24-48h内固定染色；冬天也不能超过72h。放置时间越久，厚血膜越不易溶血，染色效果也差。若不能及时染色，薄血膜宜先用甲醇固定（1～3分钟）然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干后装入盒内盖严，待以后染色。染液的种类疟原虫的染色，目前临床上应用最广泛的是瑞氏（Wrightstain）和姬氏染液（Giemsastain）。这些染液中的主要染剂都包含美蓝、伊红和由美蓝氧化所成的天青，