细胞因子对软骨细胞分化形成的作用和影响

《细胞因子对软骨细胞分化形成的作用和影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据第31卷第4期济宁医学院学报2008年12月VoL31，No．4JOURNALOFJININGMEDICALCOLLEGEDee，2008细胞因子对软骨细胞分化形成的作用和影响孙辉刘俊宾(济宁医学院附属第一人民医院)提要目的研究和评价转化生长因子一Bl(TGF—B1)和胰岛素样生长因子一I(IGF—I)在BMG三维支架中对骨髓基质干细胞向软骨细胞分化的影响和作用。方法分离骨髓基质干细胞，将无血清MesA培养液分为ABCD四组，先进行单层细胞培养，再置于松质骨基质明胶支架中继续培养，然后进行甲苯胺蓝染

2、色、蛋白多糖含量的测定。结果各组单层细胞培养的细胞个数均有显著性差异，即A组>B组>C组>D组；第20天后各组的BMG支架蛋白多糖含量，即A组>C组>B组>D组(P<0．05)。结论TGF—B1可提高骨髓基质干细胞的软骨分化能力，而IGF—I可提高TGF—p1对骨髓基质干细胞软骨分化作用。关键词骨髓基质干细胞；软骨细胞分化；TGF—B1；IGF—I骨髓基质干细胞(mesenehymalstemeelh，MSCs)在特定条件下可诱导分化为软骨细胞，人体内骨髓中MSCs的含量极其稀少，因此体外纯化和扩增MSCs

3、就显得尤为重要。这些干细胞经过培养传代扩增，向软骨细胞方向分化，最终形成软骨¨j。已证实一些细胞因子如成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子(TCF—B1)、胰岛素样生长因子(IGF—I)可以动员MSCs向软骨细胞分化HJ，我们同时应用TGF—B1和IGF—I与MSCs结合进行培养，观察其对MSCs软骨分化作用，并与单纯应用TGF—B1和IGF—I时对MSCs诱导分化的结果相比较。在自制的BMG支架中培养兔的骨髓SMCs，研究和评价TGF—B1、IGF—I、TGF—B1、IGF—I对骨髓SMCs向软骨

4、细胞诱导分化的影响和作用。1材料和方法BMG的制备：在无菌条件下，切取2月龄新西兰大白兔髂骨，去筋膜及皮质骨，剩下的松质骨。用5mmol／LNaN，洗去血液，并浸泡24h。用l：l氯仿甲醇反复脱脂直至液体清亮后，风浴挥发。1．0retooL／1盐酸进行脱钙48h，再次脱脂过夜，风浴挥发。依次用2mol／LCaCl2、0．5mol／LEDTA溶液浸泡、4mol／LLiCI连续抽提24h，用三蒸水反复漂洗除去残余试剂。以元水乙醇无水乙醚脱水、制成松质骨基质明胶(BMG)呈海绵状，一20℃保存，使用前紫外线照射1

5、2h灭菌。MSCs分离：取健康2月龄大白兔2—2．5kg(华中科技大学同济医学院实验动物中心)雌雄不限。氯胺酮+异丙嗪肌注麻醉，双侧髂部剪毛后碘伏消毒，在无菌条件下用16号骨穿刺针在髂骨翼外侧穿入骨髓腔，针管内含有0．1ml肝素钠生理盐水，抽吸骨髓液6ml移入MesA培养液5ml的离心管内混匀，1500r／rain离心5min，弃上层脂肪和上清。加入适量无血清培养液悬浮细胞，缓慢移入盛有比重为1．077淋巴细胞分离液的离心管中，以2000r／min离心20rain，小心吸取界面的有核细胞乳白层，加入M03A

6、培养液lOml，制成细胞悬液移入25era2培养瓶中，置于37℃、5％C02及饱和湿度培养箱中培养，倒置显微镜下观察呈形态一致的均质的分布均匀的细胞，计数每瓶中含有1．5×105个细眇Inl时，收集的骨髓MSC低温存储。·302·培养和诱导MSC：将无血清Mesa培养液分为ABCD四组：以每瓶中含有1．5x105个细胞／ml开始诱导培养，在24孔培养板中培养，分为四组，每组10个孔，孔内加入含有5rlg／mlTCF—B1和100ng／mtIGF—I无血清MeSA培养液作为A组，加入含有5ng／mlTCF—B

7、1无血清MeSA培养液为B组，加入含有100ng,'mlIGF—I无血清MeSA培养液作为C组，不加任何试剂的无血清Me5A培养液作为D组作为空白对照组。第5天时进行细胞传代，并计数细胞个数。第10天细胞长满了瓶壁，在进行细胞传代，即用0．25％胰蛋白酶清洗贴壁的细胞，将未贴壁的死细胞及分泌代谢产物清洗倒出，再往瓶内加入0．25％胰蛋白酶3—5ml，放入培养箱中2—3min，观察瓶内贴壁的细胞已分离成为悬浮的圆形细胞，轻轻倒出胰酶，加入5ml上述的四种不同的无血清Mesa培养液。在无菌条件下将约7×7mm2

8、大小的块状BMG支架置入每个孔内，使悬浮的细胞液覆盖于支架上，第20天时观察BMG支架中细胞形态及分布，收集BMG支架低温储存。统计学分析：实验所得的数据以孟±s表示，采用方差分析。2实验结果细胞形态和生长情况：最初接种的骨髓细胞悬液中呈圆形、大小不一，24h后，沉淀于瓶底，部分较大的圆形单核细胞贴壁；48h后贴壁的单核细胞开始增多，部分变成椭圆形；72h后细胞出现纺垂形改变，A组和B组的贴壁细胞明显增多；第5天