生长分化因子5对大鼠关节软骨细胞生长代谢的影响

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1、万方数据中医正骨2010年10月第22卷第10期(总737)‘17·--——一ii⋯__一mm—mm—m_I●●I_-●I_-_·实验研究·生长分化因子一5对大鼠关节软骨细胞生长代谢的影响张小卫，王金堂，李萌，刘淼，刘斌(西安交通大学医学院第一附属医院，陕西西安710061)摘要目的：观察生长分化因子一5对成熟软骨细胞生长代谢的影响。方法：分离和培养大鼠关节软骨细胞成功后，将细胞分为5组，在各组培养液中分别添加浓度为0Ilg·mL一、lrig·mL～、10ng·mL-。、100ng·mL-。、10

2、00ng·mL“的生长分化因子一5，采用倒置显微镜观察、M1Tr比色、阿辛蓝染色、逆转录聚合酶链式反应、胶原免疫荧光染色检测软骨细胞增殖、蛋白多糖合成、Ⅱ型胶原舍成及胶原袁型变化。结果：①倒置显微镜下观察：经生长分化因子一5培养的软骨细胞生长活跃，细胞数量增加，对数生长期提前。②MTr比色和阿辛蓝染色：吸光度值比较，各组间差异有统计学意义(F=368．032，P=0．001；F=240．048，P=0．008)：生长分化因子一5浓度越高，MTr比色和阿辛蓝染色的吸光度值越大。③逆转录聚合酶链式反应

3、电泳：随GDF一5浓度的增加，各组443bp带亮度变化不大，而268bp带亮度变化越来越明显。④免疫荧光染色：软骨细胞在含100ng·mL～GDF一5的培养液中培养21d后，只袁达Ⅱ型胶原。而不表达I、X型胶原。结论：生长分化因子一5可刺激成熟软骨细胞的增殖，促进蛋白多糖和Ⅱ型胶原的合成，并能维持软骨细胞的生物学特性。关键词软骨。关节细胞增殖细胞外基质骨形态发生蛋白类生长因子一5Emctofgrowthdifferentiationfactor一5onthegrowthandanabolicmet

4、abolismofarticularchondrocyteZhangxiao—wei+，Wang∥，l—tang，Limeng，eta1．+舭FirstAffiliatedHospitalofMedicalCollegeofXi’anJiaotongUniversity，Xian710061，Shanxi，ChinaABSTRACTObjective：Toobservetheeffectofgrowthdifferentiationfactor-5(GDF-5)onthegrowthandanab

5、olicmetabolismof小ticularchondrocytes．Methods：ThearticularchondrocyteisolatedfromratsWelFetreatedwithfivedifferentconcentrations(0tag。mL～，1ng·n1L～，10rig·mL-l，100ng·IIIL一，1000ng·nIL。)ofGDF一5．Invertedmicroscope，M1Tassay，Alcianbluestaining，RT—PCRandimmuno

6、fluorescentstainingwererespectivelyusedtomeasurethegrowthofchondrocyte，thecellularcartilagematrixformation，typeIIcollagenformationandthephenotypicdifferentiation．Results：①Invertedmicroscope：growthofchondrocyteWaspromotedandlogphaseWasadvanced．②M1Trass

7、ayandAlcianbluestaining：thedifferencesofopticaldensityweresignificantamong5groups(F=368．032，P=0．001；F=240．048，P=0．008)，theimprovementofopticaldensitysynchronizedwiththedensityofGDF一5．③RT—PCR：brightnessof268bptapebecameobviousaccompaniedwiththeimprovem

8、entofGDF一5density．whilechangesofbrightnessof443bptapewasnotsignificant．④Immunofluorescentstaining：typeⅡcollagenwereexpressedinculturefluidofGDF一5(100ng·mL“)after21days，whiletypeIandtypeXcollagenwerenotexpressed．Conclusion：GDF-5couldenhancetheg