血管内皮生长因子对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响

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1、血管内皮生长因子对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响作者：王开友，张鲁平，王颖，潘琪【摘要】［目的］探讨外源性血管内皮生长因子（VEGF）对人骨髓来源间充质干细胞（MSCs）增殖、向成软骨方向定向分化等生物学行为的影响及其机理，为MSCs构建组织工程化软骨奠定基础.［方法］取人骨髓来源间充质干细胞体外培养，将传代后的细胞分别置于含有800ng／ml和1600ng／mlVEGF的诱导培养基中进行培养，将具有促进细胞增殖分化及抑制多种炎性介质活性等多重生物学效应的TGFβ1以10ng／ml浓度配置无血清培养基诱导同组MSCs作阳性对照，观察细胞的增殖，分化。用Ⅱ型

2、胶原免疫组化染色评价不同诱导因素下的软骨基质合成情况。［结果］所有细胞显示了良好的增殖能力，暴露于外源性血管内皮生长因子下的MSCs保持了良好的生长活性，并开始向软骨表型分化，与未添加诱导因子组细胞相比差异有显著性意义，不同浓度VEGF组的细胞合成软骨基质的能力无差异，但均不如阳性对照组。［结论］外源性VEGF具有诱导体外培养的人MSCs向软骨表型分化的能力，但与TGFβ1的诱导能力相比有差距。提示VEGF在MSCs来源的软骨修复过程中充当诱导信息提供者的角色。【关键词】间充质干细胞；血管内皮生长因子；软骨细胞；分化Abstract：［Objective］Tos

3、tudytheeffectofvascularendothelialgroanbonemarroesenchymalstemcells(hMSCs)anditschondrogenicdifferenciationandtoprovideabasisforthetissueengineeringtechnologyofarticularcartilage.［Method］ThehMSCsediumcontaining800ng/mlor1600ng/mltheVEGFMSCstheculturedinthemediumcontaining10ng/mltheTG

4、Fβ1ultiplethebiologicalefficaciesthetoenhancetheproliferationtheofMSCstheandtotheinhibittheactivitiesoftheinflammatoryfactors,actedasapositivecontrol.TheinducedMSCsatrixindifferentinducefactoreasuredbyimmunohistochemicalstaining.［Result］MSCsculturedediumshoediuminducedmorechondrocy

5、tematrixthanthatinVEGFmedium.［Conclusion］VEGFinduceschondrogenicdifferentiationofMSCsinvitro,butMSCsculturedinTGFβ1mediuminducesmorechondrocytematrix.ItissuggestedthatVEGFactsasdonorofinducermessagecartilagerepairbyMSCs.Keyesenchymalstemcell;VEGF;chondrogenic;differenciation来源于骨髓的间充质干

6、细胞（mesenchymalstemcells,MSCs）属于成体干细胞。在不同的培养液、机械因素、生长因子等因素的诱导下，MSCs可分化为骨细胞、软骨细胞、成纤维细胞、肌细胞、脂肪细胞、神经细胞等中胚层来源细胞。所以自1999年Pittenger等宣布其分离到成人骨髓来源的单个MSCs并成功的向软骨表型诱导分化之后，MSCs立即成为组织工程领域最热门的种子细胞。一直以来，血管内皮生长因子（VEGF）是血管内皮细胞有效的有丝分裂原，是已知诱导血管再生作用最强的生长因子，并且在软骨组织发生、发育以及再生过程中，VEGF起着重要的调节作用。作者的实验拟通过体外培养的方

7、法观察外源性VEGF对人骨髓来源MSCs的影响，并定量分析诱导后MSCs合成Ⅱ型胶原的能力，为今后MSCs构建组织工程化软骨，应用到临床软骨修复领域奠定基础。1材料与方法1.1主要试剂及仪器25ml培养瓶，6孔板、96孔板，15ml塑料离心管（Costar），0.22μm滤膜、0.15μm滤膜，无血清DMEM培养液（HG,LG）（Gibco），胎牛血清（Gibco），胰蛋白酶（Sigma），胶原酶（Sigma），淋巴细胞分离液（天津TBD公司），TGFβ1（Sigma），血管内皮生长因子（武汉博土德生物制品公司），小鼠抗人Ⅱ型胶原抗体、羊抗小鼠二抗IgG（均购自

8、武汉博士德