反相高效液相色谱衍生化法测定氨基葡萄糖原料及其制剂的含量

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1、万方数据医药导报2008年7月第27卷第7期·85l·反相高效液相色谱衍生化法测定氨基葡萄糖原料及其制剂的含量王英瑛1”，李俊2，曾苏1(1．浙江大学药学院，杭州310030；2．浙江省台州市药品检验所，318000)[摘要]目的建立反相高效液相色谱衍生化法测定氨基葡萄糖盐酸盐和氨基葡萄糖硫酸盐及其制剂含量的方法。方法在三乙胺存在的碱性条件下，氨基葡萄糖溶液中加入芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺(FMOC-OSu)进行衍生化反应，采用岛津Shim-packVP—ODSC18色谱柱(250millx4．6mm，5斗m)，乙腈-磷酸盐缓冲液(pH

2、值2．5)(40：60)为流动相，梯度洗脱，流速1．0mL·min一，检测波长：265nin，对衍生化反应条件进行考察。结果最适宜的衍生化反应条件为：FMOC．OSu溶液、三乙胺溶液浓度分别为0．4％，0．2％，水浴温度为60℃，反应时间为30rain；氨基葡萄糖的线性范围为0．4～3．0nag·mL一，4个样品的平均回收率分别为100．1％，100．3％，99．3％，99．9％。结论该方法简便准确，专属性、重复性好，可用于氨基葡萄糖及其制剂的质量控制。[关键词]氨基葡萄糖；色谱法，高效液相，反相；衍生化法[中图分类号]R927[

3、文献标识码]A[文章编号】1004-0781(2008)07-0851-02氨基葡萄糖(2．氨基．2．脱氧．D．葡萄糖，简称GA)与人体关系密切，广泛存在于人体内，可以减少血浆中一氧化氮、前列腺素E：等的生成，抑制血小板的聚集，但都以结合型存在而无游离型，主要以3种方式存在：氨基葡萄糖盐酸盐、氨基葡糖糖硫酸盐和N一乙酰氨基葡萄糖¨o。氨基葡萄糖是关节滑液、软骨基质等器官组织的组成原料，具有抗炎和保护、营养关节和软骨的作用，已作为保健食品应用于人群¨。1，还可应用于食品、化妆品和饲料添加剂中，用途相当广泛。因此建立氨基葡萄糖含量的检

4、测方法，控制这类药品和保健食品的质量很有必要。已报道的氨基葡萄糖测定方法有滴定分析法旧J、比色法旧“o和高效液相色谱(HPLC)法”再j。笔者采用衍生化方法，通过在氨基葡萄糖溶液中加入芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺衍生化反应生成衍生物后经反相高效液相色谱(RP．HPLC)法测定氨基葡萄糖含量，方法简便，结果准确可靠。1仪器与试药1．1仪器WatersAlliance高效液相色谱仪，包括2695SeparationsModule二元泵、在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱，Waters2996二级管阵列检测器，Empower色谱工作站。1．2试

5、药氨基葡萄糖盐酸盐对照品为《美国药典》(USP)标准品，乙腈(色谱纯，美国Burdick&Jackson公司)，芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺(FMOC．OSu，99％)为分析纯，其他试剂均为分析纯试剂，流动相用水为去离子水。氨基葡萄糖盐酸盐和氨基葡萄糖硫酸钾盐原料由某生物化学有限公司提供，氨基葡萄糖盐酸盐片和氨基葡萄糖硫酸钠盐胶囊分别由市场购买。2方法与结果2．1色谱条件色谱柱g岛津Shim-packVPCIs(150mm×4．6mrn，5p．m)，柱温：30oC，流速：1．0mL·min～，检测波长：[收稿日期]20074)6-29[作

6、者简介]王英瑛(1977一)，女，浙江台州人，主管药师。在读硕士，主要从事药物分析研究。电话：0576—8552833，E-mail：yingyw{mg@hotmail．corno265nnl，流动相为梯度浓度：A．乙腈，B-磷酸盐缓冲液(pH值=2．5)，比例为40：60。梯度洗脱程序如下：0～4rain，A：B为40：60；一9min，A：B为90：10；接着等度洗脱1min；一14rain，A：B为40：60。2．2溶液配制．对照品溶液：精密称取氨基葡萄糖盐酸盐对照品20mg于10mL容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度。供试品溶

7、液：氨基葡萄糖盐酸盐，氨基葡萄糖硫酸钾盐，氨基葡萄糖盐酸盐片剂，氨基葡萄糖硫酸钠盐胶囊适量，加水超声溶解，定容至刻度，片剂和胶囊溶液用滤纸过滤后，取续滤液备用。2．3衍生化反应条件的选择2．3．1衍生化反应步骤精密量取对照品溶液或样品溶液1．0mL置50mL容量瓶中，加入0．2％三乙胺溶液lmL和0．4％的FMOC—OSu乙腈溶液5mL，摇匀，置60℃水浴中加热30rain，再立即加入冷的乙腈．磷酸盐缓冲液(40：60)的流动相使反应停止，并稀释至刻度，摇匀，用孔径0．45斗m微孔滤膜过滤后即得。2．3．2衍生化试剂浓度的确定分别

8、采用0．05％，0．10％，0。20％，0．30％。0．40％，0．50％的FMOC．OSu乙腈溶液对对照品溶液进行衍生化反应，进样后考察峰面积的变化，结果表明，当浓度为0．40％时，氨基葡萄糖总峰面积不再增加，故选择FMOC-OSu乙腈溶液的浓度