烟叶表面高效降解蛋白质芽孢杆菌的分离筛选及其鉴定

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1、冯志珍等烟叶表面高效降解蛋白质芽孢杆菌的分离筛选及其鉴定101烟叶表面高效降解蛋白质芽孢杆菌的分离筛选及其鉴定冯志珍，陈太春，胡喜怀，郭志刚，安德荣1西北农林科技大学植物保护学院，陕西省农业分子生物学重点实验室，杨凌712100；2陕西中烟工业有限责任公司，西安710065摘要：利用芽孢杆菌耐高温的特性，从烟叶表面分离筛选并得到1株可高效降解蛋白质的菌株F—Y一11，其蛋白质降解圈直径与菌落直径比值(HC值)为5．50，蛋白酶活力为25．67u。通过形态学特征及生理生化特征鉴定菌株F—Y一11为芽孢杆菌属。将其制成菌剂对烟丝进行发酵，测得蛋白质降解率为29．32％。关键词：烟叶；生物降解；

2、芽孢杆菌doi：10．3969／j．issn．1004-5708．2012．01．017中图分类号：$432．4文献标识码：A文章编号：1004-5708(2012)O1-0101-05solation，screenandidentificationofBacilluswithhighproteolyticactivityfrOmtobaccoleafsurfacesFENGZhi．zhen，CHENTai—chun，HUXi．huai，GUOZhi．gang，ANDe．rong1CollegeofPlantProtection，ShaanxiKeyLaboratoryofMolecula

3、rBiologyforAgriculture，NorthwestA&FUniversity，Yangling712100Shannxi，China；2ChinaTobaccoShaanxiIndustrialCo．Ltd．，Xihn710065，Shannxi，ChinaAbstract：AstraincalledF—Y一11wasisolatedandscreenedfromtobaccoleafsurfaces．ItsHCvalue，i．e．ratioofcolo—nydiametertoproteindegradationcirclediameter，is5．50andproteol

4、yticactivity25．67U．F—Y一11strainwasidentifiedasbacillusbymorphological，physiologicalandbiochemicalcharacteristics．Bacillusagentwaspreparedtofermentcuttobaccoandresultedina29．32％ofproteindegradabilityundercertainconditions．Keywords：tobaccoleaf；bio—degradation；bacillus1967年，Ratnavathi首次对烟叶香气有关的化学酵过程中

5、，烟叶中的蛋白质可在蛋白酶作用下分解为物质进行分析测定，大致分为酮类、醇类、脂类、烯酸、多种氨基酸，可增加烟叶内香气的前体物质¨。氨基酸糖、氨基酸酮、类胡萝卜素、烯醇类、酚类等。研究表明，在烟叶发酵过程中，微生物的生长代谢烟叶中蛋白质适量可增加香味，过多则产生辣味。发所产生的许多次生代谢产物对烟叶的化学成分的变化起着催化作用，促进大分子化合物转化和增香物质的作者简介：冯志珍(1986一)，硕上研究生，研究方向为微生物资源利产生_3，oJ利用有益微生物及其代谢产物对烟叶进行用，E—mail：fzz870508@126．con发酵，调节烟叶内生理生化代谢过程，改善烟叶化学成通讯作者：安德荣(1

6、963一)，教授，博十生导师，研究方向为微生物资分，提高烟叶香气，已成为烟草科技开发的重要课源利用及植物病理研究，E—mail：anderong323@163．con题¨。本研究从云南、陕西各地烤烟表面分离得到基金项目：冈家“863特殊生物资源开发和利用项目”l株降解蛋白质效率较高的菌株，具有潜在的应用价(2007AA021503)，陕西中烟_r=公司生物发酵增香减害项}{(2010182)值。收稿日期：2011．05．08102中国烟草学报2012年2月第18卷第1期标分别测量透明圈直径与菌落直径，根据两者比1材料与方法值(HC值)大小初步确定蛋白酶活性的高低。1．1试验材料1．3．3蛋

7、白酶活力测定烟叶样品由陕西巾娴公司提供，供试烟叶见下表。酶活单位定义：lmL液体酶在一定温度和pH值下，1min水解酪蛋白产生lg酪氨酸为1个酶活力表l供试烟叶样品单位，以“U／mL”表示。1．3．3．1生长曲线的测定将活化后的菌株(优势菌株)以5％接种量接入液体发酵培养基，放入30％、200r／rain摇床培养。于5h、10h、22h、27h、32h、44h、49h、54h吸取菌液，用紫外分光光度讣测660nm下菌液的