酶解大豆粕蛋白制备大豆低分子肽的研究

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1、万方数据田2010，VoI．27No．4亿学与生物Z程Chemistry&Bioengineering酶解大豆粕蛋白制备大豆低分子肽的研究王玉敏1。齐红丽2(1．阜新市高等专科学校，辽宁阜新123000；2．天津农学院水产科学系，天津300384)摘要：以小分子肽得率为考察指标，研究了由枯草杆茵ASl．398中性蛋白酶制备大豆低分子肽的工艺条件。通过单因素实验和正交实验确定ASI．398中性蛋白酶酶解大豆粕蛋白制备大豆低分子肽的最佳条件为：底物浓度6％、温度45℃、加酶量17000U·g～、pH值7．5。检测了在最佳条件下水解不同时间所得酶解液的

2、活性，发现水解2．5h的大豆肽液的抗氧化活性最强。关键词：大豆肽；酶解；水解度中图分类号：Q556TS201．2文献标识码：A文章编号：1672—5425(2010)04—0064--03大豆肽不仅较大豆蛋白更易于消化吸收，还具有很强的抗氧化、抗衰老、降血压、减肥等功效，且成本低廉，已成为研究者关注的热点之一。动物试验[13证明，小分子肽(由2～4个氨基酸组成的寡肽)比蛋白质和氨基酸更容易被消化吸收。以往对大豆肽的研究往往只注重大豆蛋白的酶解率，而对小分子肽得率相对忽略，这使得研究结果很难真正有效。ASI．398中性蛋白酶是一种优质的中性蛋白酶，

3、相对于木瓜蛋白酶、胰蛋白酶具有更强的水解能力[2]。作者在此以小分子肽得率为水解度考察指标，对ASl．398中性蛋白酶的特性进行了研究。1实验1．1材料、试剂与仪器脱脂大豆粕(经凯氏定氮法[3]测其蛋白质含量为85．6％)，辽宁鑫吉粮油加工公司。枯草杆菌ASl．398中性蛋白酶(酶活为5万U·g叫)，无锡雪梅酶制剂科技有限公司。紫外可见分光光度计，离心分离机，pH酸度计，凯氏定氮仪，增力电动搅拌器，电热恒温水浴锅，恒温干燥箱，九阳料理机，微量滴定管，电子分析天平等。1．2方法原料一打碎一过筛一调底物浓度一预处理一调温度一调pH值一加酶一水解一灭酶

4、。1．3水解度f以小分子肽得率计)测定水解度(DH)测定依据pH—stat法Ⅲ。2结果与讨论2．1加酶量对水解度的影响(图1)2015摹蟊琏lO*5040008000120001600020000加酶量，u．．g。图1加酶量对水解厦的影响Fig．1EffectofenzymeamountonDH由图1可知，水解度随着加酶量的增加而上升；当加酶量达到12000U·g-1后，上升趋缓。这是因为底物浓度一定时，底物的转化率取决于酶的量，酶分子越多，与蛋白质分子肽链的接触几率越大，则底物转化为产物肽也就相应增多，水解度升高；但当加酶量比较高时，底物的相对

5、浓度较小，已经被酶饱和，有一部分酶分子将不能与大豆蛋白质分子结合，导致水解度上升趋缓。综合考虑，确定适宜的加酶量为16000U·g～。2．2底物浓度对水解度的影响(图2)从图2可以看出，大豆蛋白的浓度对水解度影响不大。当底物浓度较低时，酶与底物结合几率较小，反应速度较慢，导致水解度较低；适当增加底物浓度有利收稿时期：2010—01一12作者简介：王玉敏(1969一)，女，山东人，讲师，研究方向：生物化学与分子生物学。万方数据王玉敏等：酶解大豆粕蛋白制备大豆低分子肽的研究／2010年Iii4■基趟譬*聪物浓度／％图2底物浓度对水解度的影响Fig．2

6、EffectofsnbstrateconcentrationonDH于反应速度的加快，相应水解度升高；但底物浓度达6％以后，随着底物浓度的进一步增加，水解度反而下降。因此，确定适宜的大豆蛋白浓度为6％。2．3温度对水解度的影响(图3)2I芝篷-*404，，U60温度，℃图3温度对水解度的影响Fig．3EffectoftemperatureonDH从图3可以看出，温度对ASl．398中性蛋白酶水解大豆蛋白的影响十分显著。水解度随温度的升高先上升而后下降，45℃时的水解度最高。这是因为，较低温度下，酶活力相对较低，大豆蛋白水解度低；较高温度下，蛋白酶

7、迅速失活，导致酶解反应停滞。因此，确定适宜的温度为45℃。2．4pH值对水解度的影响(图4)pH值图4pH值对水解度的影响Fig．4EffectofpHvalueonDH四从图4可以看出，ASl．398蛋白酶在微碱性条件下水解大豆蛋白的效果最好。因此，选择适宜的pH值为7．5。2．5水解时间对水解度的影响(图5)水解时间／11图5水解时间对水解度的影响Fig．5EffectofhydrolysistimeonDH从图5可以看出，水解度随水解时间的延长呈上升趋势，尤其在最初的2h内升幅显著，之后上升趋缓。这是因为蛋白酶具有专一性，随着水解时间延长，

8、蛋白酶可水解的肽键逐渐减少，同时蛋白酶活力以半衰期方式下降。但考虑原料利用的问题，选择适宜的水解时间为3h。2．6酶水解最佳工艺条件的确