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时间:2017-11-13
《医药学医学毕业论文 ho-1 mrna在肺腺癌中的表达-》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号:XXXXXXXXX姓名:XXX专业:医药学医学论文题目:HO-1mRNA在肺腺癌中的表达*指导老师:XXX二〇一一年十二月十日 戚振云1,鲍文华1,刘跃忠2,刘岩3,刘伟时 【摘要】目的探讨HO-1在肺腺癌组织中的表达状况。方法采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测27例单纯肺腺癌组及10例正常对照组织(距癌组织大约10cm)中HO-1mRNA表达水平。结果37例标本均进入半定量结果分析。肺癌组mRNA表达量(0.84±0.03),正常对照组HO-1mRNA表达量为(0.39±0
2、.02),两组有显著性差异(P0.05)。结论HO-1在肺腺癌中明显的高表达,为防治肺癌提供新思路。【关键词】肺腺癌;血红素氧合酶-1;逆转录-多聚酶链式反应【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionofHO-1mRNAinpulmonaryadenocarcinoma.MethodsReversetranscription-polymerasechainreaction(RT-PCR)wasusedtodetectHO-1mRNAexpressioninspecimensfrom27pulmonarya
3、denocarcinomaand10normaltissuesaroundthepulmonaryadenocarcinomaawayabout10cm.ResultsAllthe37specimenswereinvolvedintheanalysisofhalfquantityresults.TherelativecontentsofHO-1mRNAwas(0.84±0.03)and(0.39±0.02)in27pulmonaryadenocarcinomaand10normaltissuesaroundthecancer.Significantdi
4、fferenceexistedbetweenthetwogroups.(P0.05).ConclusionHO-1mRNAexpressioncontentwassignificantlyhigh.【Keywords】pulmonaryadenocarcinoma;hemeoxygenase-1;RT-PCR血红素氧合酶(hemeoxygenase,HO)是一种血红素降解的催化酶和限速酶,可将血红素分解成一氧化碳(carbonmonoxide,CO)、胆红素和铁。已发现HO有3种同工酶[1],分别为HO-1、HO-2及HO-3。HO-1在呼吸系统疾病中
5、已有广泛研究,而在肺腺癌实体中HO-1表达情况尚未有文献报道。为探讨HO-1在人肺癌组织中的表达状况,我们采用RT-PCR方法检测27例肺腺癌及正常组织中HO-1mRNA的表达情况,结果报告如下。1资料与方法1.1病理资料肺腺癌组:选择2004~2005年黑龙江省佳木斯市肿瘤结核医院肺癌手术标本,组织学诊断采用1981年WHO肺癌组织学分类标准。正常对照组:为肺腺癌手术患者中余10例无其他基础性疾病,在远离癌组织约10cm取肺组织。均为手术切除后立即取材,液氮冷冻。1.2引物序列及合成HO-1引物依照文献[2]设计的序列,由北京奥科生物技术有限责任公司
6、合成,引物序列如下:上游引物:5’-CGGGCCAGCAACAAAGTG-3’;下游引物:5’-AGTGTAAGGACCCATCGGAGAA-3’,扩增片段长度为107bp。β-actin内参照引物,由北京奥科生物技术有限责任公司合成,上游引物:5’-TCCTCCCTGGAGAAGAGCTA-3’,下游引物:5’-TCAGGAGGAGCAATGATCTTG-3’,扩增的目的片段长度为302bp。1.3组织总RNA的抽提试剂合购自宝生物(大连)公司。取100mg冷冻保存的组织标本,在液氮内研磨,取90mg加入已装好1mlTrizol的EP管中,剧烈振荡,
7、静置5min,用1ml针筒抽吸2次。加入200μl氯仿,用力摇晃15s,静置2~3min,12000r/min4℃离心15min,将上清移入另一EP管中,加入500μl异丙醇,静置10min,12000r/min4℃离心10min,弃上清,加入75%乙醇1ml洗RNA2次,7500r/min4℃离心5min,干燥RNA,加无RNA酶的水30μl在60℃孵育10min,琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA质量,紫外分光光用紫外/可见光分光光度计检测A260、A280,确定RNA纯度及浓度。所有实验中的塑料制品都经1%DEPC处理后高压灭菌。1.4逆转录-多聚酶链式反
8、应(RT-PCR)取1μg总RNA进行逆转录反应,逆转录产物取5μl进行PCR。使用50μl反
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