EB病毒对NK_T细胞淋巴瘤细胞感染相关研究

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1、学校代码10459学号或申请号201522443908密级公开专业硕士学位论文EB病毒对NK/T细胞淋巴瘤细胞感染相关研究作者姓名：梁晓露导师姓名：张明智教授专业学位名称：肿瘤学培养院系：郑州大学第一附属医院完成时间：2018年3月Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMaster（doctor）Epstein-BarrVirusInfectionofNK/T-celllymphomaByXiaoluLiangSupervisor:MingzhiZhangDepartmentof

2、OncologyTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMarch,2018原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关

3、部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日EB病毒对NK/T细胞淋巴瘤细胞感染相关研究研究生：梁晓露导师：张明智教授郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052摘要背景淋巴瘤(lymphoma)是起源于淋巴结或结外淋巴造血组织的免疫细胞恶性肿瘤，按病理类型一般分为非霍奇金淋巴

4、瘤(Non-Hodgkin'slymphoma，NHL)和霍奇金淋巴瘤(Hodgkin'slymphoma，HL)。淋巴瘤的发病率及死亡率呈逐年上升趋势；NHL的发病率远高于HL，是增长速度最快的恶性肿瘤之一，严重威胁人类健康。EB病毒(Epstein-BarrVirus，EBV)是发现最早的与人类恶性肿瘤有关的病毒，是一种普遍存在于人群中的嗜淋巴细胞的疱疹病毒，90%以上的成人血清中可检测到EBV抗体阳性。EB病毒基因组长172kb，为线性双链DNA病毒。此病毒能在淋巴细胞中潜伏感染，引起细胞增生和转化，EBV有潜伏感染和裂解感染两种形式，以潜伏感染最多见。潜伏循环中

5、，EBV在被感染的细胞内不增殖，只表达小部分基因：3种潜伏膜蛋白、6种核抗原以及非翻译EBV编码的RNA。根据EBNA2、EBNA3A、EBNA3B、EBNA3C基因序列的差异EB病毒可分为1型和2型，主要流行株为1型，其在体外转化B细胞的能力高于2型。NK/T细胞淋巴瘤(NaturalKiller/Tcelllymphoma，NKTCL)是具有高度侵袭性的来源于自然杀伤(naturalkillercell，NK)细胞的非霍奇金淋巴瘤，主要浸润结外器官，一般首先累及鼻腔或鼻咽部，以及其他部位如扁桃体、胃肠道、皮肤、睾丸等。依据肿瘤发生部位不同，NKTCL分为鼻腔NKTC

6、L和鼻型INKTCL，肿瘤细胞以血管为中心浸润，往往伴有灶性坏死和血管的破坏。晚期患者往往存在凝血功能障碍及多器官功能衰竭，预后极差。NKTCL发病率居于T细胞淋巴瘤的首位，其发病具有显著地域差异，亚洲、南美洲国家及墨西哥较多，而欧美少见。许多研究表明，非霍奇金淋巴瘤中EB病毒的T细胞性淋巴瘤远远比EB病毒阳性的B细胞性淋巴瘤多，特别是结外NKTCL，EBV的阳性率可达95%，提示EBV在本病的发病中起着重要作用。目的鉴定本实验室保存的NK细胞系感染EB病毒的1或2亚型；探究EBV能否在体外感染NK细胞，为探索EB病毒在NK/T细胞淋巴瘤发生发展中的机制作铺垫。材料与方

7、法1.常规PCR鉴定NK细胞系各细胞株感染EB病毒1或2亚型：提取本实验室保存的NK细胞系各细胞株DNA,根据EBNA-3C特异性编码序列区的设计引物，采用常规PCR方法鉴定各NK细胞系感染EB病毒1、2亚型。2.从B95-8细胞培养液上清中提取EB病毒，感染NKL细胞。实验分组：①6实验组（E-NKL组）：取1×10个细胞，800rpm离心5min，弃上清液；用浓缩100倍的EB病毒液0.5ml重悬淋巴细胞;重悬的的细胞放入37℃水浴锅中2h，每30min摇匀一次。恒温水浴2h后，将NKL细胞移入到六孔板中，加入2ml含有10%胎牛血清