严重烧伤早期大鼠肺泡巨噬细胞CD14的表达及调控.doc

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1、严重烧伤早期大鼠肺泡巨噬细胞CD14的表达及调控作者:李友良,叶祥柏,王光毅,郇京宁,陈玉林,夏照帆【摘要】目的探讨严重烧伤对大鼠肺泡巨噬细胞(AM)CD14膜蛋白(CD14)和mRNA基因表达变化的影响,以及抗CD14抗体对AM产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的调控作用。方法20%Ⅲ度烧伤大鼠检测早期外周血内毒素(LPS)浓度,体外分离培养AM,RT-PCR方法观察膜表面CD14mRNA表达、免疫组化方法观察蛋白含量及ELISA方法观察分泌TNF-α和IL-6的变化。烧伤血清刺激体外培养的正常大鼠AM,观察培养上清中TNF-α和

2、IL-6浓度变化及CD14抗体的抑制作用。结果烧伤后外周血LPS各时相点LPS浓度均明显高于对照组,与此相对应,烧伤组大鼠AM各时相点CD14mRNA表达、蛋白含量均明显增高,AM培养上清中TNF-α和IL-6浓度亦显著增高(P<0.01)。以烧伤血清与AM培养1h后,烧伤组培养上清中TNF-α和IL-6浓度增加值明显高于对照组(P<0.01),而在CD14抗体存在时,TNF-α和IL-6浓度增加值明显小于烧伤组(P<0.01)。结论严重烧伤后外周血LPS浓度增加,AM膜表面CD14受体亦显著增加,使LPS对免疫系统的激活作用显著增大

3、,AM分泌TNF-α和IL-6明显增加,提示严重烧伤后可以通过调节CD14的作用而减少炎性介质的合成和分泌。【关键词】烧伤;肺泡巨噬细胞;CD14;TNF-α;IL-6【Abstract】ObjectiveToobservetheroleofpulmonaryalveolarmacrophage(AM)CD14membraneproteinontheproductionofTNF-αandIL-6afterseverelyburnedratsinearlystage.MethodsSDratswereburnedwith20%TBSAⅢ°injurya

4、ndthedynamicchangesofplasmalevelofLPSwasobserved.AfterAMsofburnedratswereisolatedandcultured,levelofCD14mRNAexpressionandproteinofAMsproducedbyAMsweredetectedwithRT-PCR,immunohistochemicalandELISAmethodsrespectively.Invitro,levelofTNF-αandIL-6inthesupernatantofnormalratAMscultur

5、edwithpostburnserumwithorwithoutCD14antibodywerealsodetected.ResultsLevelofplasmaLPSincreasedsignificantlyaftersevereburninjury.Correspondingly,theexpressionofCD14mRNAandproteinofAMsandlevelofTNF-αandIL-6inthesupernatantofAMsalsoincreased.WhenAMswereculturedwithpostburnserum,the

6、levelofTNF-αandIL-6inthesupernatantincreasedsignificantly,whichcouldbereversedatthepresentofCD14antibody.ConclusionAftersevereburninjury,theroleofLPSstimulationtoimmunesystemaugmentsbecauseoftheincreaseofplasmaLPSlevelandAMsCD14receptornumbers,resultingintheincreaseofTNF-αandIL-

7、6secretion.Thisindicatesthattheproduction5ofproinflammatorycytokinesmaybeinhibitedviamodulatingCD14signaltransduction.【Keywords】burn;pulmonaryalveolarmacrophage;CD14;TNF-α;IL-6严重烧伤后大量肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)等前炎性细胞因子释放,导致全身炎症反应综合征(SIRS)的发生,单核-巨噬细胞在此过程中起关键作用,不仅是大量细胞因子的来源,也可能是后续炎症

8、反应放大的启动因素,但其中的机制尚有较多不明之处。本实验通过观察内毒素(LPS)受体CD14在

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