严重烧伤早期大鼠肺泡巨噬细胞CD14的表达及调控.doc

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1、严重烧伤早期大鼠肺泡巨噬细胞CD14的表达及调控作者：李友良，叶祥柏，王光毅，郇京宁，陈玉林，夏照帆【摘要】目的探讨严重烧伤对大鼠肺泡巨噬细胞（AM）CD14膜蛋白（CD14）和mRNA基因表达变化的影响，以及抗CD14抗体对AM产生肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）的调控作用。方法20%Ⅲ度烧伤大鼠检测早期外周血内毒素（LPS）浓度，体外分离培养AM，RT-PCR方法观察膜表面CD14mRNA表达、免疫组化方法观察蛋白含量及ELISA方法观察分泌TNF-α和IL-6的变化。烧伤血清刺激体外培养的正常大鼠AM，观察培养上清中TNF-α和

2、IL-6浓度变化及CD14抗体的抑制作用。结果烧伤后外周血LPS各时相点LPS浓度均明显高于对照组，与此相对应，烧伤组大鼠AM各时相点CD14mRNA表达、蛋白含量均明显增高，AM培养上清中TNF-α和IL-6浓度亦显著增高（P<0.01）。以烧伤血清与AM培养1h后，烧伤组培养上清中TNF-α和IL-6浓度增加值明显高于对照组（P<0.01），而在CD14抗体存在时，TNF-α和IL-6浓度增加值明显小于烧伤组（P<0.01）。结论严重烧伤后外周血LPS浓度增加，AM膜表面CD14受体亦显著增加，使LPS对免疫系统的激活作用显著增大

3、，AM分泌TNF-α和IL-6明显增加，提示严重烧伤后可以通过调节CD14的作用而减少炎性介质的合成和分泌。【关键词】烧伤；肺泡巨噬细胞；CD14；TNF-α；IL-6【Abstract】ObjectiveToobservetheroleofpulmonaryalveolarmacrophage（AM）CD14membraneproteinontheproductionofTNF-αandIL-6afterseverelyburnedratsinearlystage.MethodsSDratswereburnedwith20%TBSAⅢ°injurya

4、ndthedynamicchangesofplasmalevelofLPSwasobserved.AfterAMsofburnedratswereisolatedandcultured,levelofCD14mRNAexpressionandproteinofAMsproducedbyAMsweredetectedwithRT-PCR,immunohistochemicalandELISAmethodsrespectively.Invitro,levelofTNF-αandIL-6inthesupernatantofnormalratAMscultur

5、edwithpostburnserumwithorwithoutCD14antibodywerealsodetected.ResultsLevelofplasmaLPSincreasedsignificantlyaftersevereburninjury.Correspondingly,theexpressionofCD14mRNAandproteinofAMsandlevelofTNF-αandIL-6inthesupernatantofAMsalsoincreased.WhenAMswereculturedwithpostburnserum,the

6、levelofTNF-αandIL-6inthesupernatantincreasedsignificantly,whichcouldbereversedatthepresentofCD14antibody.ConclusionAftersevereburninjury,theroleofLPSstimulationtoimmunesystemaugmentsbecauseoftheincreaseofplasmaLPSlevelandAMsCD14receptornumbers,resultingintheincreaseofTNF-αandIL-

7、6secretion.Thisindicatesthattheproduction5ofproinflammatorycytokinesmaybeinhibitedviamodulatingCD14signaltransduction.【Keywords】burn;pulmonaryalveolarmacrophage;CD14;TNF-α;IL-6严重烧伤后大量肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）等前炎性细胞因子释放，导致全身炎症反应综合征（SIRS）的发生，单核-巨噬细胞在此过程中起关键作用，不仅是大量细胞因子的来源，也可能是后续炎症

8、反应放大的启动因素，但其中的机制尚有较多不明之处。本实验通过观察内毒素（LPS）受体CD14在