糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR2的表达及对肽聚糖反应性的研究

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1、·中文论著摘要·糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR2的表达及对肽聚糖反应性的研究目的肺脏作为糖尿病损害的靶器官本世纪70年代以来才逐渐被大家关注，广泛涉及肺功能、生化代谢、肺组织病理等诸多方面，其中肺局部防御功能降低所致下呼吸道感染最为常见。Toll样受体(Tolllikereceptors，TLRs)是近年来新发现的一种同源于果蝇Toll的蛋白分子，在对抗细菌的先天免疫过程中发挥了关键的作用，并且与糖尿病密切相关，现已日益受到关注。TLRs能够对病原体识别、结合，引发一系列信号间的转导，促进各种炎性介质的释放。在这个大家族中TL

2、R2和TLR4最为受关注，TLI毪能识别许多病原菌相关分子模式，包括革兰氏阳性球菌的肽聚糖，此次实验我们研究了肽聚糖刺激下TLR2在正常大鼠及糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞表达，希望能进一步了解糖尿病病人肺部免疫机能变化的机制，以期为感染和糖尿病的关系提供迸一步的证据，并为糖尿病感染的治疗和控制提供新的作用点。材料与方法一、材料(～)实验动物：健康雄-[生Wistar大鼠32只，SPF级，鼠龄12周，体重(200土20)--L兑o(二)仪器与试剂：Universal32R离心机、血糖仪、链脲佐菌素(sTZ)、肽聚糖(PGNstaph

3、ylococcusaureus)、兔抗鼠TLR2二、方法(～)动物模型制备及分组：将32支雄性健康WistarXN，体重约200克左右，随机分为4组：正常对照组(A组，n：8)，糖尿病组(B组，n=8)，正常+PGN组(C组，n：8)，糖尿病+PGN组(D组，n=8)。糖尿病组一次性腹腔注射链脲佐菌素60mg／kg体重，正常对照组注射同等剂量枸橼酸-枸橼酸钠缓冲溶液，72d'时后1随机血糖>16．67mmol／L为糖尿病模型成功，以后每周复查1次血糖，连续观察4周。(二)肺泡巨噬细胞的获取及培养：大鼠用水合氯醛麻醉成功后，经

4、气管插管行支气管肺泡灌洗，回收BALF，巨噬细胞培养，C组及D组加入终浓度为10ug／mlPGN孵育。(三)免疫细胞化学染色：采用免疫细胞化学染色SABC'法，染色时兔抗鼠TLR2的浓度为1：200。阳性反应为胞膜和胞浆呈棕黄色着色。(四)TLR2mRNA表达测定(五)统计分析：采用SPSSl3．0统计软件处理，实验数据用i士s表示，各组间指标比较用双因素双水平析因分析，P<0．05为差异有统计学意义。实验结果一、免疫细胞化学结果正常组大鼠肺泡巨噬细胞TLR2表达，以胞浆及胞膜为主呈较淡的棕黄色改变；糖尿病组细胞TLR2在上

5、述部位表达渐增多，颜色稍加深；正常+PGN组及糖尿病+PGN组细胞的胞浆及胞膜呈深棕黄色改变，部分细胞变性坏死。平均光密度值：正常组O．1146+0．002，糖尿病组0．1731士0．011，正常+PGN组0．2059+0．011，糖尿病+PGN组0．2931+0．017。二、TLR2mRNA表达正常组O．898+0．084，糖尿病组1．202+0．07，正常+PGN组1．628+0．“，糖尿病+PGN组2．307+0．13。糖尿病因素及肽聚糖因素导致肺巨噬细胞内TLR2表达增高，P(0．001，糖尿病及肽聚糖有较明显的主效

6、应以及交互作用。结论糖尿病可促进大鼠肺泡巨噬细胞TLR2表达，使机体处于促炎症状态，将可能导致免疫系统功能紊乱，使机体肺部的免疫防御功能下降。关键词Toll样受体2；糖尿病；肽聚糖2●英文论著摘要Expressionoftoll--likereceptor2inalveolarphagofdiabeticandponsetoPGNmacropha2esbeticratsandresOn1-■0DIectiveThelungasoneofdiabetestargetdamagedorganhadbeenpaidmoreatte

7、ntionsince70softhiscentury．Thedamagesofdiabetesinvolvepulmonaryfunction．biochemistrymetabolismandpathologyofthelungandSOon．Thelocaldefensefunctiondeficitofthelungleadingtolowerrespiratorytractinfectisverycommon．TheToUlikereceptors(TLRs)aremolecularproteinsdiscovere

8、dinrecentyears，theyaresyngeneicwiththemolecularproteinsofDrosophila．Andtheyplaycrucialroleintheinnateimmuneres．ponsetobacteria．Otherwise，theyaref