急性脑出血对肝细胞凋亡的影响.doc

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1、急性脑出血对肝细胞凋亡的影响【摘要】目的:观察大鼠急性脑出血后肝细胞凋亡的影响。方法:按体重将大鼠随机分为假手术组(10只)和脑出血组(20只),建立大鼠脑出血模型,24h后取肝脏组织，采用免疫组织化学方法观察各组肝脏组织中bcl2的表达水平,利用HPIAS2000图像分析系统测定bcl2在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果:脑出血组bcl2呈低表达，假手术组bcl2呈高表达。图像分析结果显示，假手术组与脑出血组之间bcl2的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.05)。结论:大

2、鼠急性脑出血后可导致肝细胞凋亡。【关键词】急性脑出血；肝脏；细胞凋亡；免疫组织化学脑出血(intracerebralhemorrhage,ICH)是神经系统常见病和多发病,出血后继发性损害导致的组织细胞死亡具有重要意义。有研究显示,细胞凋亡机制参与了脑出血继发性神经细胞损伤［1～2］。本研究采用免疫组织化学方法观察了大鼠急性脑出血后导致肝细胞凋亡的研究，旨在探讨急性脑出血后所致周围器官损伤的机制。1材料与方法1.1实验动物与分组健康Wistar大鼠30只,雌雄不分，体重300～350g,武汉大学医学院实验动物中心提供,适应

3、饲养1w后进行实验。将大鼠随机分成假手术组(10只)和脑出血组(20只)。1.2方法1.2.1建立脑出血模型根据《大鼠脑立体定位图谱》定位［3］,选择前囟后0.2mm,矢状缝向左2.9mm,深6.0mm为注射点,位于近内囊的尾壳核内。水合氯醛400mg·kg-1经腹腔麻醉大鼠,俯卧固定于鼠脑定位仪,经注射点注入1μl胶原酶肝素溶液。假手术组大鼠注入1μl生理盐水。1.2.2免疫组织化学SP法检测bcl2相关抗原主要步骤：5μm组织切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢处理10min以抑制内源性过氧化物酶活性，bcl2均采用高

4、压抗原修复，正常羊血清处理10min以减少非特异性背景，一抗4℃孵育过夜，生物素标记的二抗处理10min，链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶复合物处理10min，DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应，苏木精复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗作为阴性对照组。1.3免疫组织化学结果判断bcl42以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。采用HPIAS1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统对bcl2抗原的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个高倍镜视野(×400)，测定每个视野下阳

5、性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。1.4统计学处理对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和q检验，检验水准α为0.05。2结果bcl2的表达：假手术组肝细胞内有较多棕黄色颗粒，bcl2表达强；脑出血组肝细胞内可见极少量的棕黄色颗粒，bcl2表达极弱。图像分析结果显示：假手术组bcl2表达的平均光密度为3.531±1.325，脑出血组bcl2表达的平均光密度为0.962±0.059；假手术

6、组bcl2表达的阳性面积率为2.548±1.755，脑出血组bcl2表达的阳性面积率为0.741±0.046。经单因素方差分析，各组间的差异有显著性意义(P＜0.05)。经q检验，假手术组与脑出血组之间bcl2的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.05)，见表1。表1急性脑出血后各组肝细胞bcl2表达的平均注：*假手术组与脑出血组比较，P＜0.05。3讨论脑出血(ICH)是指脑实质内血管非创伤性的自发性出血,出血可扩张到脑室及蛛网膜下腔。原发性ICH是常见的一种类型,常见于高血压性或淀粉样脑血管

7、病(CAA),继发的ICH与血管畸形、肿瘤、血液病、颅内动脉瘤等有关［4～6］。研究发现,脑出血后6～12h血肿周围中性粒细胞浸润,并释放出各种炎症因子,48～72h达到高峰,大量的中性粒细胞在炎性趋化因子作用下阻塞微小血管,造成脑缺血和脑损伤,这些趋化因子包括:肿瘤坏死因子、单核细胞趋化因子、白介素1～12、干扰素调节因子,C5～C9参与,3d后这些炎症物质聚集于微血管基底膜,血脑屏障破坏,继发性脑损伤。临床资料观察发现脑出血常伴有多器官功能损害,以伴有心脏、肝脏和肾脏的损害多见［7］。脑出血后会引起脑组织局部和机体一系

8、列病理生理变化,病理损伤机制包括血肿的占位损伤和继发性缺血损伤。脑出血后血肿周围脑组织受压,水肿明显,颅内压增高造成神经功能缺损可引起一系列植物神经内分泌功能紊乱,肾素血管紧张素分泌增加,导致脏器缺血,出现脏器损害［8］。脑出血后存在继发性脑缺血,局部脑血流量(rCBF)下降［9～11］,可导致细胞