氟美松对急性肝损伤大鼠肝细胞fasfas配体表达和细胞凋亡的影响论文

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1、氟美松对急性肝损伤大鼠肝细胞FasFas配体表达和细胞凋亡的影响论文周高速张振书王凡林汉军朱洁【关键词】氟美松EffectsofdexamethasoneonFas/Fasligandexpressionandapoptosisofhepatocytesinratsentbydexamethasoneandtoevaluatethepotentialroleandmechanisminthepathogenesisofacuteliverinjury.METHODS:ExpressionofFas/Fa

2、sLproteinandmRNAmunohistochemistryandinsituhybridization,respectively.ApoptosisinedbyterminalUTPnickendlabelling(TUNEL)inratsduringeveryphaseofacuteliverinjury.RESULTS:ExpressionofFas/FasLproteinandmRNAinistrationofdexamethasonesuppressedapoptosisasRNA(P

3、0.05).CONCLUSION:DysregulationofapoptosisandactivationofFas/FasLsystemmayplayakeyroleinthepathogenesisofLPSinducedacuteliverinjuryinrats,ethasonemayobstructtheactivationofFas/FasLsystemandapoptosisofhepatocytesinratsage.【Keyethasone;LPS;liverinjury;Fas/F

4、asL;apoptosis【摘要】目的:观察内毒素急性肝损伤后肝细胞凋亡和Fas/Fas配体（FasL）表达的变化，以及氟美松对其影响，探讨急性肝损伤早期作用机制.方法:采用免疫组化和原位杂交技术检测各时相点肝细胞Fas/FasL蛋白和mRNA的表达；应用原位末端标记技术对各时相点肝细胞凋亡进行检测.结果:内毒素急性肝损伤各时相点大鼠肝细胞Fas/FasL蛋白和mRNA的表达较对照组明显上调（P0.05），且与肝细胞凋亡的增加相一致；氟美松可明显减轻炎症反应，抑制脂多糖（LPS）诱导的肝细胞凋亡，并使肝

5、细胞Fas/FasL蛋白和mRNA的表达明显下调（P0.05）.结论:肝细胞凋亡和Fas/FasL系统活化可能参与内毒素急性肝损伤早期的发病机制，而且加重早期肝损伤；氟美松可抑制Fas/FasL系统活化，阻断和调控凋亡.freelgkg-1，注射LPS后1,2,4,6和8h活杀;氟美松治疗组,在注射LPS5mgkg-1同时尾静脉注射氟美松10mgkg-1，于注射后1,2,4,6和8h活杀;正常对照组,.freelL，于注射后6h活杀.每个时相点为6只大鼠.活杀后取肝组织观察Fas/FasL表达及细胞凋亡

6、.1.2方法肝细胞凋亡原位检测采用TUNEL法，按BM公司试剂盒提供方法稍加改进.免疫组化Fas/FasL检测采用SP法，兔抗Fas多克隆抗体，兔抗FasL多克隆抗体购自美国SantaCruzBiotechnology公司.Fas/FasLmRNA原位杂交检测：Fas/FasL寡核苷酸探针由中国科学院上海生物工程研究中心合成，序列如下：Fas5′CTGTTTCAGGATTTAAGGTTGGAGATT3′,FasL5′CTTCACTCCAGAAAGCAGGAC3′，按试剂盒提供方法进行标记，标记后探针质量

7、及特异性按BM公司提供方法进行检测，均符合要求.结果判断标准：①肝细胞凋亡：阳性细胞为核呈棕黄色显色，阴性细胞为核无棕黄色显色，计算5个高倍视野（×400）下的凋亡的细胞数，凋亡指数以凋亡细胞/100个细胞表示;②Fas/FasL蛋白质表达判断：阴性细胞的胞质或(和)胞膜均无棕黄色染色，阳性细胞的胞质或(和)胞膜棕黄色染色，阳性程度分为4级：0级为低倍镜视野阳性细胞偶见，1级为阳性细胞小于1/3，2级为阳性细胞为1/3~2/3，3级为阳性细胞大于2/3；③Fas/FasLmRNA原位杂交结果判断；阳性细

8、胞的胞质或胞核呈紫蓝色染色，阴性细胞无紫蓝色染色，分级程度同②.统计学处理：凋亡指数以x±s表示，组内各时相点比较用t检验，同一时相点组间比较用方差分析，采用SPSS10.0处理.2结果2.1肝细胞凋亡Fas/FasL蛋白表达免疫组化结果提示，氟美松治疗组Fas/FasL蛋白质表达的明显减弱(Tab1)，与对照组表达水平相近.表1急性肝损伤大鼠Fas/FasL蛋白的表达(略)2.2肝细胞Fas/FasLmRNA的表达原位杂交结果表明，氟美松