脂氧合酶抑制剂NDGA对HT.doc

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1、脂氧合酶抑制剂NDGA对HT作者：夏光涛张源潮武森森张尚忠【摘要】目的：探讨脂氧合酶抑制剂NDGA在体外对结肠癌HT29细胞株生长抑制、凋亡影响。方法：应用MTT法绘制生长曲线；倒置相差显微镜观察细胞形态变化；扫描电镜观察细胞的超微结构变化，检测凋亡小体；流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期变化。结果：不同浓度NDGA处理HT29结肠癌细胞，随着药物浓度加大，细胞形态变圆，体积缩小，从瓶壁上逐步脱落，肿瘤细胞凋亡率逐步上升，癌细胞阻滞于G0／G1期。应用扫描电镜可见凋亡小体形成。结论：NDGA对结肠癌HT29细胞具有抑制生长、诱导凋亡

2、作用，凋亡率随药物浓度加大逐步升高。具有剂量依赖效应。【关键词】脂氧合酶抑制剂・结直肠肿瘤・凋亡ResearchonapoptosisofcoloncancercelllineHT29inducedbyNDGA【ABSTRACT】Objective:TofindouttheeffectofNDGA(NordihydroguaiareticAcid),thelipoxygenaseinhibitor,oncoloncancercelllineHT29invitrofromtheaspectsofcellg

3、rowthinhibition,cellapoptosis.Methods:Weappliedrespectively.①MTTtodrawthegrowthcurve.②invertedphasecontrastmicroscopetoobservemorphologicchangeofcellsaswellasscanningelectronmicroscopetoobservechangesofcell’sultramicrostructureandapoptoticbody.③flowcytometrytoexaminet

4、heapoptosisandperiodicchangesofcells.Results:WeuseddifferentconcentrationofNDGAtodisposecancercellindependently.Accompanyingtheriseindrug’sconcentration,apoptosisrateofcellsrosegradually,morphologicofcellsbecameround,thevolumebecamesmallandtheyabscisedfromtheinnersurf

5、aceofthebottle.apoptoticbodycouldbefoundthroughscanningelectronmicroscope.ThegrowthofcellswasblockedinthestageofG0/G1.Conclusions:NDGAcaninhibitcoloncancercelllineHT29growthandinduceitsapoptosis,therateofwhichrisesfollowingtheincreaseofdrugconcentrationanddisplaysther

6、elyingeffectofdoses.ThedrugblocksthecellinthestageofG0/G1.【KEYWORDS】Lipoxygenaseinhibitors・Colorectalneoplasms・Apoptosis花生四烯酸的代谢分为环氧化酶（COX）和脂氧合酶（LOX）两个途径。COX是环氧化酶途径的关键酶。抑制COX活性能够诱导结肠癌细胞凋亡，抑制癌细胞转移，对此国内外学者已达成共识，抑制LOX途径能否抑制结肠癌细胞生长、诱导凋亡，目前国内外鲜有报道。本文应用NDGA(No

7、rdihydroguaiareticAcid)处理HT29结肠癌细胞株，研究是否可抑制肿瘤细胞生长，诱导凋亡为临床治疗提供依据。51材料与方法1.1仪器及设备37℃CO2恒温培养箱（NV2500E。美国），超净工作台（YJ－1450S，苏州），倒置相差显微镜（Olympus，日本），普通光学显微镜（Olympus，日本BH2），台式高速离心机（HERMLEZK380），酶联免疫检测仪（BIORAD450型），流式细胞仪（FACScan型，美国BD公司），JSMT300扫描电镜（日本JEOL公司）以及其他培养细胞常用设备。1.2材料

8、和试剂1.2.1结肠癌细胞株HT29细胞株购自山东省医学科学院肿瘤生物治疗中心。1.2.2主要试剂RPMI1640培养液和胰蛋白酶购自Gibco公司。新生小牛血清购自中国杭州四季青生物工程材料研究所。NDGA购自Calbiochem公司，四氮唑盐（