青钱柳不同外植体组织培养及褐变防止的研究

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1、青钱柳不同外植体组织培养及褐变防止的研究作者：吴群英徐庆李丽亚梁荣感龚受基【摘要】　　目的探索青钱柳快速繁殖途径和褐变的防止方法。方法分别在不同季节采取青钱柳的嫩芽、带节茎段和嫩叶作为外植体，对外植体进行4种不同方式的处理后，接种到不同激素种类和激素组合的培养基中进行培养。结果春季取材更易诱导出愈伤组织和新芽；诱导茎段出芽的最佳培养基为B5+mg/L+mg/L+mg/L；适宜于嫩叶、嫩芽愈伤组织诱导的培养基分别为：B5+mg/L+mg/L+mg/L和B5+2，4－/L+/L；外植体先于4℃低温预处理d和直接用烧

2、红的手术刀快速切割外植体后再进行接种可有效减少外植体的褐变。结论青钱柳组织培养可诱导芽的产生和愈伤组织的形成。【关键词】青钱柳组织培养褐变Abstract：ObjectiveTostudytherapidpropagationandpreventionofbrowningofCyclocaryapaliurus(Batal.)Ijinskaja.MethodsTenderbuds,nodularstemsegments,andtenderleavesweretakenasexplantsindifferents

3、easons.Theexplantsweretreatedinfourdifferentways,andthenculturedondifferentwasthebestseasonforcollectingandthemostsuitablemediumfornodularstemsegmentstoinducebudswasB5+mg/L+mg/L+mg/L;asfortenderleaves,B5+mg/L+mg/L+mg/Lwasoptimumtoinducecallus,andB5+mg/L+mg/L

4、+mg/Lwasthebestfortenderbudstoformcallus.Puttingtheexplantsundertheconditionof℃fordaysandcuttingtheexplantsquicklywithaaglowscalpelbeforeinoculatingcoulddecreasethebrowningeffectively.ConclusionThetissuecultureofCyclocaryapaliurus(Batal.)Ijinskajacancaninduc

5、ebudsandcallus.Keywords：Cyclocaryapaliurus(Batal.)Ijinskaja；Invitroculture；Browning　　青钱柳Cyclocaryapaliurus(Batal.)Ijinskaja，系双子叶植物纲胡桃科青钱柳属植物［1］，又名青前李、山麻柳、甜茶树、一串钱等，是我国独有的单种植物，也是国家重点保护的濒危植物之一。据《中国中药资源志要》记载，其树皮、树叶具有清热解毒、止痛功能，可用于治疗顽癣。相关研究报道，青钱柳不仅含有人体必需的钾、钙、磷、镁等常

6、量元素，还含有对人体具有保健作用的微量元素，被有关专家认为是可能治愈2型糖尿病的极佳良药［2］。　　青钱柳种子具有深休眠习性，自然生长的青钱柳不仅数量少，且多零星分布于深山老林，自然更生率低，人工栽培青钱柳的成活率也不高［3］，严重影响了青钱柳的开发利用与产业化进程。因此，对青钱柳进行快速繁殖成为目前迫切需要解决的问题［4］。目前，有关青钱柳组织培养的报道并不多，且培养过程中也没有提及出现褐变现象［5,6］。本研究对不同外植体类型、不同季节取材、不同激素种类和激素组合等因素与青钱柳的组织培养的关系进行研究，探讨

7、不同处理方式与青钱柳组织培养褐变的关系，以期寻找到青钱柳组织培养中芽及愈伤组织诱导的最佳方法，为青钱柳快速繁殖提供技术支持和参考依据。1材料与方法材料以7年生青钱柳植株当年抽生枝条作为材料，取材季节分为春、夏、秋季三季采摘。方法外植体的处理对外植体设计4种不同的处理方式：①将外植体用剪刀剪成所需长度或大小后，进行消毒和接种作为对照组；②在接种的培养基中添加浓度为%的活性炭；③外植体切成所需大小后于冰箱4℃低温下预处理d再进行接种；④将外植体用烧红的手术刀快速切割成所需大小后进行接种。外植体的消毒和接种将外植体于

8、洗衣粉水中浸泡20min，流水冲洗1～h，接种前先在75％的酒精中浸泡20～30s，无菌水冲洗3次后根据外植体不同类型用％的升汞处理6～1min，再用无菌水冲洗4次，在无菌条件下接种到培养基上，每瓶接种1个外植体，每一处理接种30瓶。每隔25～30d继代1次。培养基的设计　　B5为基本培养基，附加3％的蔗糖和％的琼脂。诱导芽的培养基为：①++；②++；③++；诱导愈伤组织的培养基为：④