活体细胞溶酶体形态活性荧光染色试剂盒产品说明书（中文版

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1、活体细胞溶酶体形态/活性荧光染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途活体细胞溶酶体形态/活性荧光染色试剂是一种旨在通过长波长的荧光染料特异性地聚集在溶酶体，并呈现红色，用于分析和观察溶酶体形态以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种溶酶体（动物、人体、昆虫等）的形态观察、活性探测和定位标记。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定，滞留持久。技术背景溶酶体（lysosome）是一种普遍存在于真核细胞中的细胞器，含有酸性水解酶，例如酯酶、淀粉酶

2、、蛋白酶、核酶等，分解各种细胞残渣和废弃物质，包括过多的或破损的其它细胞器、食物颗粒、吞噬的细菌和病毒等。其大小为0.5至1.5微米，球圆形，溶酶体内pH为5.0左右。溶酶体功能异常会引起溶酶体贮积症（1ysosomalstoragedisorders；LSDs），例如家族性白痴病（Tay-sachsdisease）和庞贝氏症（Pompe’sdisease）。溶酶体荧光探针LysoTrackerRED，是一种向酸性（acidotropic）探针，含有荧光基团在弱碱上，高度选择性地染色酸性细胞器溶酶体。探针自由通过细胞膜

3、，选择性地聚集在溶酶体内。它可以对活细胞进行直接染色，在590nm波长可以清晰看到被染成红色的溶酶体。产品内容清理液（ReagentA）毫升固着液（ReagentB）毫升染色液（ReagentC）微升产品说明书1份保存方式保存染色液（ReagentC）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月用户自备完全细胞培养液：用于染色后培养液更换24孔细胞培养板：用于贴壁细胞染色的容器1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器微型台式离心机：用于沉淀细胞培养箱：用于染色孵育（共聚焦）荧光显微镜：用于细胞荧光分析5

4、实验步骤一、贴壁细胞标准染色1．准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项12）2．小心抽去细胞培养液3．小心沿着孔壁加入500微升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔，覆盖培养孔表面4．小心加入xx微升染色液（ReagentC），小心摇动培养板，使其混匀（注意：参见注意事项9和10）5．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟6．小心抽去含有染色液（ReagentC）的细胞培养液7．小心沿着孔壁加入1毫升37℃预热的用户

5、自备的完全细胞培养液到细胞培养孔8．小心抽去完全细胞培养液9．小心沿着孔壁加入1毫升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔10．即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长577nm，散发波长590nm（溶酶体呈现红色）二、贴壁细胞快速染色1．准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项12）2．直接加入xx微升（1：500容量比）染色液（ReagentC）到1毫升培养液里，小心摇动培养板，使其混匀（注意：参见注意事项9和1

6、0）3．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟4．小心抽去含有染色液（ReagentC）的细胞培养液5．小心沿着孔壁加入1毫升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔6．即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长577nm，散发波长590nm（溶酶体呈现红色）三、悬浮细胞或脱离细胞染色1．将悬浮细胞或脱离细胞（1X106细胞）移入到1.5毫升离心管2．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf5415）3．小心抽去上清液4．加入500微升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液

7、5．加入xx微升染色液（ReagentC），充分混匀（注意：参见注意事项9和10）6．放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟7．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf5415）8．加入500微升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液，混匀9．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf5415）10．小心抽去完全细胞培养液11．移出5微升到载玻片上，放上盖玻片12．（选择步骤）如果需要双重染色，移出3.5微升染色细胞到载玻片上13．（选

8、择步骤）加入1微升用户需测的第二染料，放上盖玻片14．（选择步骤）放进37℃细胞培养箱里孵育10分钟15．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长577nm，散发波长590nm（溶酶体呈现红色）5四、细胞双重染色1．准备1个载玻片培养皿的待测细胞2．小心抽去细胞培养液3．小心加入1毫升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液4．