2014细胞生物学实验课内容(细胞形态观察细胞器活体染色细胞骨架观察)

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1、实验三细胞形态的观察【实验目的】1.认识光学显微镜下细胞的形态结构；2.掌握临时制片和显微绘图的方法。【材料、器材和试剂】材料：人体口腔黏膜上皮细胞、洋葱鱗茎；器材：S微镜、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、牙签、滤纸；试剂：1%碘液。【方法和步骤】1.口腔黏膜上皮细胞的制片与观察口腔黏膜细胞涂片标本的制备：吸収一滴碘液滴在一张洁净的载玻片屮央，用一根事先灭菌的牙签伸入自己的口腔内壁轻轻刮取黏膜上皮细胞，然后，将其放入载玻片上的染液中并来回搅动使细胞散开，染色1min左右后小心加盖玻片（尽量避免产生气泡），用滤纸吸去盖玻片周围的液体。观察：将自制的口腔黏膜上皮细胞标本装片

2、置于显微镜下观察，先用低倍镜观察较分散的、轮廓清晰的黏膜上皮细胞。由于该细胞体积较小、着色较淡，观察吋应稍降低视野亮度以便于较快找到目标（在低倍镜下，用碘液染色的细胞呈黄色，成群或分散分布，形态大小多呈扁平椭圆形）。选择轮廓清晰的细胞移至视野中央，转换至高倍镜下观察。在高倍镜下，可见n腔黏膜上皮细胞外围有一层薄薄的细胞膜，扁圆形的细胞核呈深黄色，细胞质呈浅黄色或浅蓝色，核中央致密的结构为核仁。2.洋葱鳞茎内表皮细胞的制片与观察表皮细胞装片标本的制备：取一干净载玻片，在其中央滴一滴碘液，将洋葱鱗茎用小刀分为几块，取一块肉质鳞叶，用剪刀在内表皮划“田”字形小方格，每一小

3、方格边长3-4mm,然后用镊子轻轻撕下一小方格的膜质表皮，置于载玻片的碘液滴中铺平，取一干净的盖玻片，将其一侧先接触标本旁的碘液，再缓缓地盖上盖玻片，尽量避免产生气泡，用滤纸吸去盖玻片周围的液体。观察：将制备好的装片标本放到显微镜T,先用低倍镜观察，可见许多长柱状、排列整齐、彼此相连的细胞，选择其中一个典型的细胞移至视野中央，再转换至高倍镜下仔细观察细胞壁、细胞核、细胞质和液泡等结构。【实验结果】绘图并进行适当标注：人口腔黏膜上皮细胞和洋葱鱗茎内表皮细胞【讨论】简述观察细胞形态时，制作临时装片和显微镜镜检时的注意事项。实验四线粒体和液泡系的活体染色【实验目的】1.掌

4、握一些细胞器的超活性染色技术和原理。2.观察动物、植物细胞I々线粒体和液泡系的形态、数量和分布。【材料、器材和试剂】材料：人体U腔黏膜上皮细胞、洋葱；器材：显微镜、牙签、镊子、剪刀、载玻片、盖玻片；试剂：Ringed容液；1/5000詹纳斯绿B溶液；1/3000中性红溶液。【方法和步骤】1.线粒体的超活染色与观察（1）人体口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色和观察①取清洁载玻片放在37°C恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液；②用一根预先灭菌的牙签仲入自己的口腔内壁轻轻刮取黏膜上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10-15min（注意不

5、可使染液干燥，必要时可再加一滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置于显微镜下观察；③在低倍镜下，选择平展的口腔黏膜上皮细胞，转换高倍镜进行观察。可见扁平状.卜.皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或棍棒状的线粒体。（2）洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色和观察①用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴在干净的载玻片上，然后用镊子撕取洋葱鱗茎内表皮一小块，置于染液中，染色10-15mim②吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮展平，盖上盖玻片，S微镜下观察。在高倍镜T,见表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤至旁边，线粒体染成

6、蓝绿色，呈颗粒状或线条状。2.液泡系的超活染色和观察①洋葱鳞茎内表皮一小块，賈于1/3000中性红溶液中，染色5-10min;②吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮展平，盖上盖玻片，显微镜下观察，可见被染成砖红色的屮央大液泡。【实验结果】1.根裾实验观察，绘制洋葱鱗茎Pl表皮细胞和人体口腔黏膜上皮细胞线粒体分布阁。2.根据实验观察，绘制洋葱鳞茎表皮细胞指示液泡系的形态和分布。【讨论I1.简述线粒体詹纳斯绿B活体染色和液泡系中性红活体染色的原理;2.分析线粒体和液泡系活体染色时需要注意的事项。3.细胞内线粒体的形态和分布有何特点？实验五植物细胞骨架的光学显微镜

7、观察【实验目的】了解细胞骨架的结构特征及其样品制备技术。【材料、器材和试剂】材料：洋葱鱗茎；器材：普通光学显微镜、50ml烧杯、玻璃滴管、容ffl瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子、小剪刀、吸水纸、擦镜纸；试剂：M缓冲液;6mmol/L(pH6.8)磷酸缓冲液；1%TritonX-100；0.2%考马斯亮蓝R250;3%戊二醛。【方法和步骤】1.撕取洋葱鱗茎内表皮(约1cm2大小若干片)置于装有pH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯巾，使其下沉；2.吸去磷酸缓冲液，用1%TritonX-100处理20-30min;3.吸去TritonX-100,用M缓冲液洗3次,每次